案例3:细胞核和线粒体编码的转录本的m1A甲基化修饰-Base-Resolution,期刊:MolecularCell 影响因子:13.84,本研究通过单碱基分辨率方法的m1ARNA甲基化测序技术鉴定了细胞核和线粒体中m1A 甲基化修饰位点。结果发现大多数m1A甲基化修饰富集在mRNA的5’UTR,小部分符合“GUUCRA”基序的m1A 位点由一个已知的甲基化酶复合物TRMT6/61A 修饰。此外,线粒体编码的转录本中也有大量的m1A 甲基化修饰。该研究还表明,位于5’UTR 区,尤其是转录本di一和第二位上的m1A 可促进mRNA 翻译,而位于编码区的m1A 可抑制翻译作用。因此,m1A 测序不仅揭示了核编码和线粒体编码的转录本上不同类型的m1A 甲基化修饰,还为进一步m1A 甲基化功能验证提供了重要工具。细胞样品或新鲜组织块(切成5-10 mg的小块),可用TRIZOL或RNA保护剂处理。西青区m1AlncRNA测序
2.m1A-MAP揭示人全转录组m1A修饰,作者通过m1A-MAP在人全转录组水平上进行检测,发现了740个m1A修饰位点,其中473个位点位于mRNA和lncRNA,大部分位于5’-UTR。通过比对SNP数据库,作者还排除了假阳性结果。另外,作者通过多核糖体图谱还发现5’-UTR区域发生m1A与mRNA翻译效率呈正相关,且这种正相关性在cap+1位置上更xian著,但在CDS区域和3’-UTR区都没有出现。这些发现不同位置的m1A修饰可能发挥不同的生物学功能。通过motif分析,作者发现m1A修饰位点偏好GUUCRA序列。另外,作者发现TRMT6/61A不仅是tRNAm1A甲基化酶复合物,也是mRNA上发生m1A修饰所需要的酶。朝阳区研究m1ANature突破性研究—RNA甲基化新修饰 m1A。
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为了探寻m6A修饰与结直肠ai(CRC)的糖酵解代谢的相关性,采用qPCR检测结直肠ai患者体内脱氧葡萄糖吸收(FDGuptake)和m6A修饰相关酶表达的情况,发现Mettl3(m6A甲基化转移酶)的表达与FDG摄取存在明显的相关性。同时检测到在CRC体内Mettl3高表达和葡萄糖代谢强烈保持一致,那么在结直肠ai患者体内FDG和Mettl3的变化是否影响甲基化整体水平的变化呢?作者采用多种方法检测高FDGCRC和低FDGCRC患者体内甲基化水平,结果表明m6A修饰水平在这些FDG摄取较高的CRC患者中也xian著升高。m1ARNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化,即RNA分子腺嘌呤di1位氮原子上的甲基化修饰(N1-methyladenosine,m1A)。目前对m1A甲基化修饰研究的报道是发表在Molecular Cell上的一篇论文。
MolecularCancer(IF=10.679)杂志刊登了m6A修饰研究:m6A依赖的糖酵解增强结直肠ai(CRC)发生。该文章采用多组学联合应用技术检测了Mettl3-KO(m6A甲基化转移酶敲除细胞株)和WTHCT116(结直肠ai细胞株)甲基化修饰,这项研究揭示METTL3通过m6A-IGF2BP2/3-依赖性机制稳定HK2和SLC2A1(GLUT1)在CRC中表达,表明m6A修饰的糖酵解途径可以促进结直肠ai的发展,同时为以METTL3及其途径为靶点高糖代谢的CRC患者提供了合理的zhi疗靶点和zhi疗方向。m1ARNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化,即RNA分子腺嘌呤di1位氮原子上的甲基化修饰(N1-methyladenosine,m1A)。m1A-MAP揭示核编码和线粒体编码转录本上不同类型的m1A甲基化组。滨海新区m1AlncRNA测序
分辨质谱对mRNA中的m1A修饰进行定量,发现其存在于各种细胞系中。西青区m1AlncRNA测序
m1ARNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化,即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰。研究表明,m1A是真核生物tRNA和rRNA丰度很高的一种转录后修饰,近期研究也表明m1A修饰可调控mRNA翻译。m1A修饰作为一类新型RNA甲基化,其功能和机制都亟待挖掘。与m6ARNA检测方式一致,针对m1A修饰也采用MeRIP-seq技术,抗体富集的技术原理如下:将m1ARNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育,抓取有甲基化修饰的片段进行测序;同时需要平行测序一个对照(Input)样本,对照样本为未进行IP反应的RAN片段,对照样本用于消除非特异性抓取甲基化片段的背景。西青区m1AlncRNA测序
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