外泌体的提取方式: 1、离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。 2、过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样纯度不足。 3、密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂 4、免疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。 5、色谱法:此种方法分离出的外泌体大小均一,但设备特殊,应用不普遍。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分。过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样纯度不足。天津平台外泌体miRNA测序
外泌体作为一种新型细胞间信息交流的方式,在细胞间物质运输和信号交流中发挥重要作用,并参与了机体多种生理和病理过程。研究发现,外泌体中存在的非编码RNA(ncRNA)与胃ai的发生、发展和耐药性存在关联。此外,外泌体在胃ai进展和幽门螺杆菌感ran(胃ai的主要危险因素)之间的相互作用中起着至关重要的作用。因此,靶向外泌体或这些外泌体衍生的ncRNAs可能是一种医治胃ai的新方法。来自北京大学tumour医院的邢晓芳、季加孚、李子禹等人在MolecularCancer上发表综述文章,总结了外泌体的起源和特征以及外泌体ncRNA和胃ai之间的详细联系,指出靶向外泌体极其衍生ncRNA在诊断、医治胃ai方面具有广阔前景。湖北平台外泌体全转录测序外泌体可通过化学信号参与ai细胞的转移。
H.Valadi等发现,细胞之间可以通过外泌体中的RNA来交换遗传物质。这意味着细胞可以通过外泌体影响另外一个细胞,甚至可以把自己的基因强加给另外一个细胞。研究人员逐渐对小小的外泌体产生了极大的好奇。他们发现,tumour细胞的外泌体与正常细胞的外泌体之间存在差异,tumour的外泌体会促进tumour的生长和转移,tumour周围组织细胞分泌的外泌体具备杀伤tumour细胞的能力,等等。2013年的诺贝尔生理或医学奖颁给了三位科学家,他们分别是美国科学家James E. Rothman和Randy W. Schekman,德国科学家Thomas C. Südhof,以表彰他们发现细胞内部囊泡(外泌体等)运输调控机制。使外泌体的研究达到全新的高度。就外泌体的研究方向而言,干细胞、免疫、microRNA、靶向给药、ai症的诊断及医治等都是热门研究领域。
外泌体普遍存在于生物体的免疫应答反应中,外泌体可以通过介导促炎症反应来促进免疫反应,tumour细胞分泌的外泌体还可以抑制免疫反应。tumour细胞分泌的外泌体可以促进ai症的侵袭和转移,加快ai症部位的血管生成,有助于tumour微环境中的上皮间充质转化,并且增强tumour的耐药性。外泌体通过与受体细胞特异性结合的方式,传递各种生物学信息,发挥重要的生物学作用。本文分别就外泌体的产生机制、分离与鉴定、其对机体免疫过程和疾病的发生和发展的作用等方面的研究进展进行综述。免疫磁珠法:可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。
一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白,是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合,有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中,RAB7和RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、热休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。在神经系统和精神疾病,中医学及其他领域也有不少外泌体相关项目中标。北京服务外泌体全转录测序
外泌体中携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息。天津平台外泌体miRNA测序
奥沙利铂耐药性是结直肠ai医治中的一大挑战,调节性T细胞(Treg)的免疫抑制作用可能在其中发挥作用。另外,外泌体中的miRNA可能作为预测化疗敏感性的潜在生物标志物。天津医科大学的巴一团队及应国光团队在MolecularTherapy上发表的一项较新研究,发现结直肠ai细胞通过外泌体分泌的miR-208b可抑制CD4+T细胞中的PDCD4表达,以促进Treg扩增,从而导致结直肠ai小鼠模型对奥沙利铂医治的耐药性。另外,在结直肠ai患者中,miR-208b的高表达与较差的预后相关。天津平台外泌体miRNA测序
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