广东云序测序RNA甲基化

云序生物对ac4CRNA乙酰化检测手段为acRIP-Seq技术，技术原理如下：将乙酰化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有乙酰化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本只含有打断的RNA的片段，并不添加RNA乙酰化特异性抗体与其共孵育。对照样本用于消除非特异性抓取的乙酰化片段的背景。对比免疫共沉淀（IP）样本和对照样本（Input）中的序列片段，将RNA乙酰化修饰位点定位到转录组上，并根据RNA-seq数据，计算样本中RNA乙酰化程度及对RNA表达水平的影响。每个样品组做一个Input，以去除基因组背景，降低假阳性率 。广东云序测序RNA甲基化

样本要求样品类型细胞、组织或RNA，其他样本类型请电询。测序样品量1.单碱基测序方式：a)细胞：≥1×108b)组织：500mg-5gc)RNA：100μg-300μg2.MeRIP测序方式：a)细胞：≥2×107b)组织：100mg-1gc)RNA：30μg-300μgd)超微量满足500ng-30μg样品运输及保存样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。吉林上海云序生物测序云序生物的服务涉及全国多个地区，各大高校、医院。

案例3：拟南芥m5CRNA甲基化谱及TRM4B酶对根的影响原文：Transcriptome-WideMappingofRNA5-MethylcytosineinArabidopsismRNAsandNoncodingRNAs期刊：ThePlantCell影响因子：8.23与上篇不同，本研究团队采用m5CRNA甲基化测序研究拟南芥中m5C甲基化谱，在种子，幼芽，根中发现了1000多个特异性的位点。敲低RNAm5C甲基转移酶TRM4B，造成tRNA稳定性的降低。研究人员还证实TRM4B突变体的初级根比野生型更短，同时对氧化的应激反应更敏感。

比色法检测整体甲基化水平实验原理比色法RNA甲基化定量检测试剂盒提供了定量检测总RNA甲基化水平的试剂。采用类似ELISA抑制竞争免疫的方法，实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育；然后转移到包被有RNA甲基化多核苷酸的条孔上。在孵育之后孔可以洗脱任何未包被的试剂然后添加检测抗体生成信号，通过微孔板读取仪（例：酶标仪）来检测。因为在样本的RNA甲基化抑制了RNA甲基化抗体与涂抹在孔上RNA甲基化的结合，样本中更高浓度导致与在孔中的RNA甲基化结合减少。因此，从孔中测得信号或OD参数与样本中RNA甲基化的数量成反比。并且样本中RNA甲基化的量可以通过预先设定的RNA甲基化标准品来实现定量检测。样品置于1.5mL管中，封口膜封好，干冰运输。

案例1：小肠腺ai的特异性甲基化组图谱本文通过MeDIP测序研究了小鼠模型小肠腺ai起始过程中的甲基化变化，发现了13,000多个与小肠腺ai发生相关的差异甲基化区（DMRs）。进一步分析发现：组蛋白修饰复合物PRC2的靶基因在高甲基化DMRs中明显富集，说明组蛋白修饰与DNA甲基化密切相关。此外，在不同类型细胞中，通过重亚硫酸盐焦磷酸测序证实：这些DMRs是腺ai细胞中全新形成的，而不是通过小肠干细胞或未分化隐窝细胞中已有甲基化模式的扩展形成的。更为有趣的是，作者发现了一些DMRs，它们在小鼠腺ai和人类结肠ai间是保守的，并因此找到了一些在结肠ai中受表观遗传修饰的基因，揭示了甲基化修饰作为临床分子标志物的潜力。云序采用多种方法高效地富集环状DNA，环状DNA检出率高。广西测序全转录组

云序生物可进一步提供高精度的O8G氧化图谱。广东云序测序RNA甲基化

研究还发现，m6Am修饰是一个可逆的动态修饰，当细胞遭遇热激、低氧等应激性刺激时m6Am水平上升，说明m6Am可能在细胞应激反应中扮演了重要角色。近来也有研究发现，除了mRNA的较早编码核苷酸残基以外，在snRNA内部也有m6Am甲基化修饰的分布。虽然m6Am修饰早在1975年就已经被人类发现，但由于检验手段的匮乏，科学家难以区分出m6A修饰与m6A修饰，因此直到近年来m6Am测序技术逐渐发展成熟，才为进一步深入研究m6Am这一重要的RNA修饰铺平了道路。广东云序测序RNA甲基化

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