牛痘DNA拓扑异构酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)与细菌DNA拓扑异构酶的主要区别如下:1.**来源不同**:-牛痘DNA拓扑异构酶I来源于牛痘病毒,是一种真核生物病毒中的酶。-细菌DNA拓扑异构酶则来源于原核生物,如大肠杆菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓扑异构酶I能够解旋DNA的超螺旋结构,并且识别并切割双链DNA末端[5’C(T)CCTT],与DNA形成共价连接形成稳定复合物,遇到DNA的5’-OH基团后,重新连接形成完整DNA链。-细菌DNA拓扑异构酶,如大肠杆菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA链断开和结合的偶联反应,以改变DNA的拓扑结构。3.**活性条件**:-牛痘DNA拓扑异构酶I即使在Mg2+不存在的条件下也显示活性。-细菌DNA拓扑异构酶可能需要Mg2+等金属离子作为辅因子来发挥活性。4.**作用的DNA链**:-牛痘DNA拓扑异构酶I能使正负两方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由来的DNA拓扑异构酶I只作用负链的超螺旋分子。5.**共价键形成**:-牛痘DNA拓扑异构酶I与DNA形成共价连接,此酯键中所贮存的能量可能在切断端的再结合上起着作用。-细菌DNA拓扑异构酶在原核生物中是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键。
FnCas12a在切割DNA时产生黏性末端,有助于提高同源定向修复(HDR)的效率。1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)
在PCR实验中,防止非特异性扩增的关键在于优化实验条件和采取一些特定的策略。以下是一些有效的方法:1.**优化引物设计**:引物设计是PCR成功的关键。应确保引物序列具有高度特异性,避免与非目标序列互补。使用在线工具进行引物设计,并进行BLAST搜索以确认特异性。2.**使用热启动PCR**:热启动PCR技术可以抑制室温下的DNA聚合酶活性,减少非特异性扩增。这种方法通过在高温下激起酶的活性,从而在PCR体系配制阶段降低引物与模板或引物与引物之间的非特异性结合。3.**调整Mg2+浓度**:Mg2+浓度对PCR扩增的特异性和产量有重要影响。过高的Mg2+浓度可能导致非特异性扩增,因此需要优化Mg2+浓度以获得比较好的结果。4.**退火温度优化**:退火温度对PCR特异性至关重要。较高的退火温度有助于减少非特异性结合,但过高的退火温度可能会降低引物与模板的结合效率。通常,退火温度设置比引物的Tm值低5°C左右。5.**使用降落PCR**:降落PCR(TouchdownPCR)通过在初始循环中使用较高的退火温度,然后逐渐降低退火温度,从而在PCR开始时减少非特异性扩增,同时在后续循环中保持特异性扩增。RNA/蛋白抽提试剂盒FnCas12a可以识别不同的PAM序列,例如5'-TTN-3',这增加了它可以靶向的基因组区域 。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一种利用磁珠技术从血液中提取基因组DNA的试剂盒。以下是一些关键特点和应用:1.**高效提取**:该试剂盒采用特殊的磁珠和缓冲体系,能够快速且高效地从100μl至1ml的血液中分离和纯化高质量的基因组DNA。2.**磁珠特性**:独特的磁珠具有很强的核酸亲和力,在特定条件下可以快速分离和纯化核酸。这些磁珠对磁场响应迅速,使得提取过程既安全又便捷。3.**提取过程**:血液样本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,释放出的基因组DNA与磁珠特异性结合。通过磁分离架的作用,磁珠与溶液快速分离,经过洗涤去除杂质,用洗脱液将基因组DNA从磁珠上洗脱下来。4.**应用广**:提取的基因组DNA可用于多种分子生物学实验,如PCR扩增、酶切、基因分型、Southern杂交、高通量测序、基因组DNA文库构建等。5.**操作简便**:整个抽提过程大约需要50分钟,操作简便,无需使用有毒有害的有机试剂,如酚或氯仿,提高了实验的安全性。6.**高纯度和高回收率**:提取的DNA纯度高,A260/A280通常在1.7-1.9之间,表明蛋白和RNA的污染低。回收率通常超过80%。
BsuDNAPolymerase(嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶)在PCR中的应用具有多个优势,以下是一些关键点:1.**链置换活性**:BsuDNAPolymerase具有很强的链置换活性,这使得它非常适合于等温扩增技术,如重组酶聚合酶扩增(RPA)。在这些技术中,BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特异性地扩增模板,在10到30分钟内将痕量的核酸模板(低至单拷贝)扩增至可以检出的水平。2.**高温稳定性**:BsuDNAPolymerase在高温下保持活性,这使得它在一些需要高温反应的实验条件下表现出色。3.**高灵敏度和特异性**:BsuDNAPolymerase在等温扩增中展现出高灵敏度,能够将微量核酸模板扩增到可检测水平。同时,它也具有高特异性,减少了非特异性扩增的风险。4.**简化的样品处理**:BsuDNAPolymerase可以直接对复杂样品进行扩增,无需事先进行复杂的核酸纯化和提取步骤,节省了时间和成本。5.**可扩增DNA和RNA**:BsuDNAPolymerase不仅可以扩增DNA,还可以直接扩增RNA,省去了额外的逆转录反应(cDNA合成)步骤,这对于RNA的检测和分析更加方便快捷。6.**无核酸外切酶和RNase残留**:BsuDNAPolymerase在生产过程中确保无核酸外切酶、切口酶及RNase残留,这有助于提高实验的准确性和重复性。泛素连接酶E3识别特定的靶蛋白,并促进E2上的泛素转移到靶蛋白的赖氨酸残基上,形成泛素化标记。
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,简称λExonuclease)是一种具有特定特性和应用的酶,以下是其主要特点和应用:1.**特异性作用**:λExonuclease是一种5'→3'核酸外切酶,能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**酶切活性**:对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**嗜磷酸性**:该酶具有非常强的嗜磷酸性,磷酸化的核酸链与非磷酸化的核酸链的切割效率相差达200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一种具有高度持续性的碱性核酸外切酶,可以连续地将核酸切割成为单个碱基,切割比较高速率可以达到1000nt/S。5.**应用领域**:-生成单链PCR产物用于DNA测序。-DNA单链构象多态性(SSCP)分析。-滚环扩增。-从双链DNA片段生成单链DNA。-PCR产物的克隆。-质粒制备净化。6.**酶活性定义**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37ºCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit :适用于从总RNA或mRNA模板合成链cDNA,具有高热稳定性。Recombinant Human Hepcidin/HAMP Protein,GST Tag
去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes, DUBs)可以去除泛素化蛋白上的泛素链,使泛素分子得以回收和再利用。1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一种从嗜热脂肪芽孢杆菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是关于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些关键信息:来源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更强的5'-3' DNA聚合酶活性、链置换活性和dUTP耐受性,适合用于抗污染的等温扩增反应,如LAMP和CPA等。应用:主要应用于等温DNA扩增,包括环介导等温扩增(LAMP)和其他等温扩增技术。规格:活性定义:1 U指的是在65°C下30分钟内将10 nmol的dNTP整合到酸不溶物质中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。产品形式:提供的产品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),货号14402ES,以及冻干粉形式的产品,货号14405ES,不含甘油。灵敏度和稳定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高灵敏度,低至5copies目的基因可测,且在飞克(fg)级别的模板量下也能快速达到阈值。在37°C下,该酶可以保持相对稳定的效应长达5天,并且在-20℃下可以稳定保存2年。储存条件:建议在-25℃至-15℃下储存,以保持产品活性,并避免反复冻融。1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)
Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (5U/µl):高效去除尿嘧啶的分子生物学工具Uracil-DNA Glycosylase(UDG)是一种来源于大肠杆菌的重组酶,能够高效催化DNA链中尿嘧啶(dU)碱基与脱氧核糖骨架之间的N-糖苷键水解,释放游离尿嘧啶。这种酶对单链和双链DNA均有效,但对RNA或短于6个碱基的DNA寡核苷酸无活性。产品特点UDG酶的主要特点是能够在PCR反应中有效防止产物污染。通过在PCR反应中掺入dUTP替代dTTP,生成含有dU的DNA产物,UDG可以特异性降解这些含dU的DNA,从而避免PCR产物的交叉污染。此外,UDG酶在较宽的pH范...