南京正规外泌体提取试剂服务电话

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时，外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式：一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中，外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从而细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合，非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA外泌体提取：样品中大分子不能进入凝胶孔，只能沿多孔凝胶粒子之间的空隙通过色谱柱，被流动相洗脱出来。南京正规外泌体提取试剂服务电话

专利申请利用分离培养人尿液来源细胞并收集培养基来进行体外培养，直接把外泌体从尿液中沉降下来，无须分离培养人尿液来源细胞并收集培养基。人尿液来源细胞的外泌体的获取方法，是首先分离培养人尿液来源细胞并收集培养基，将人尿液来源细胞的培养基通过0.22微米滤膜过滤，以去除大的细胞残片以及其它杂质；然后离心除去细胞器，留取上清；再使用可截留100KD分子量的膜，通过离心截留上清中的外泌体，截留完成后，使用PBS对膜进行洗脱即得到外泌体浓缩液。北京正规外泌体提取试剂厂家批发价外泌体提取：可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌体。

外泌体的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌体表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）为常用的多聚物，可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等

外泌体相关蛋白质与肺病的诊断：近年来众多文献报道，肺病细胞分泌的外泌体中富含多种蛋白质并促进肺病的发生的发展，是早期诊断肺病的有效途径。有研究发现，NSCLC患者肺组织外泌体表面EGFR免疫染色呈阳性的占80%，而慢性肺炎组织的外泌体EGFR呈阳性的只占2%，因而认为外泌体的EGFR蛋白可以用作NSCLC与慢性肺炎鉴别诊断的生物标志物。Park等通过Sys-BodyFlu-id数据库分析发现153种特异性胸腔积液外泌体蛋白质，进一步的Westernblotting分析显示多种特异性胸腔积液外泌体蛋白参与EGFR信号传导途径以促进一些病症的发生的发展，因此外泌体蛋白可能作为肺病诊断筛查的生物学标记物。近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒。由于国内有关外泌体提取试剂的缺乏，我国对外泌体的研究还基本依赖于过程繁琐的超速离心和进口提取试剂盒。

外泌体的提取、分离方法：免疫亲和层析法。免疫亲和层析法是利用生物体内存在的抗原、抗体之间高度特异性的亲和力进行分离的方法，主要用于生物大分子的分离、纯化。将其应用于外泌体的分离主要是借助外泌体表面的特异性抗体，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗体的特异性结合，只有囊泡表面有特异性的抗体才可以被识别，这使得提取的外泌体纯度高，但是产量低。Zarovni等分别用超速离心、密度梯度离心和免疫层析法，从血浆和细胞上清中提取外泌体蛋白，结果表明，免疫亲和层析法得到的外泌体表面存在多种标记蛋白(Alix、CD9、CD63)，同时，ELISA和PCR结果也证明了该方法的可行性。可以使用NanoSight®或电子显微镜分析纯化的外泌体，以评估近似外泌体大小范围和浓度。杭州正规外泌体提取试剂厂家推荐

同时可获得高纯度和高回收率的外泌体——如新西兰IZON开发的系列的外泌体排阻剂。南京正规外泌体提取试剂服务电话

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是目前外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。外泌体检测作为一种新型的液体活检热点技术已被许多临床科研机构普遍地应用于一些病症和疾病的无创诊断。南京正规外泌体提取试剂服务电话