芯弃疾JX-8B数字ELISA产品
每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测
我们已经开发了两种临床相关蛋白的检测方法——前列腺特异性抗原（PSA）和肿瘤坏死因子α（TNF-α），以确定高酶标记物单体提供的灵敏度转化为高灵敏度的检测方法血液中的蛋白质。两种蛋白质的数字ELISA如图1所示。开发这些试验的关键参数是：珠子浓度和两种标记试剂（检测试剂和酶偶联物）的浓度。珠子浓度的选择取决于几个相互竞争的因素。首先，足够的珠子必须在场以从热力学和动力学中捕获大部分目标分析物从热力学角度看，100μL中有20万个珠子，每个珠子大约有8万个与之结合的抗体25相当于约0.3nM的抗体浓度，在该浓度下，抗体-蛋白平衡导致高捕获效率（>70%）(D.M.R.，E.P.F.，D.C.D.，未发表工作）。 POCT 芯片搭配小型化设备，即时检测 hs-cTnT 等指标，为急诊救治提供快速数据支持。代理数字ELISA高速检测
芯弃疾JX-8B数字ELISA，每个生物/医学实验室都用得起的单分子免疫检测；
单分子的检测原理：由Simoa数字免疫分析法实现的超灵敏度已在先前讨论过。简而言之，类似免疫分析中的酶-底物反应是在相对较大的反应体积（50-100µL）中进行的，在信号生成步骤中稀释了产物分子。信号分子的扩散和稀释将灵敏度限制在皮摩尔范围内。相比之下，Simoa通过将单独标记的免疫复合物和底物限制在飞升大小的孔中，从而限制了荧光产物分子从酶-底物反应中的扩散。当单一酶标签催化底物转化为荧光产物时，产生的荧光团被限制在孔中，从而在短时间内产生可测量的荧光信号。代理数字ELISA高速检测芯弃疾JX-8B数字ELISA，低成本单分子检测；
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动力学上，对于200,000个微球分散在100μL中，珠子之间的平均距离约为80μm。大小为TNF-α和PSA（分别为17.3和30kDa）的蛋白质将在不到1min的时间内扩散80μm。表明，在2小时的孵育过程中，蛋白质分子的捕获不会受到限制动力学上。其次，必须有足够的珠子被加载到阵列上以限制泊松噪声。200,000个珠子加载到50,000孔阵列中，通常会导致20,000–30,000个微球被困在1mL孔中。对于典型的背景信号为1%活性微球（见下文），这种装载导致背景信号为200-300个活性微球检测到，对应于泊松噪声的可接受变异系数（CV）为6-7%。第三，过高的微球浓度可能导致：a）非特异性结合增加，降低信噪比；以及b）分析物与微球的比例过低，导致活性微球的比例过低，从而导致泊松噪声引起的高CV。这些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿；可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人第5页因素意味着每100μLoftest样品含有20万到100万颗珠子是比较好的数字ELISA。同时，为了获得可接受的背景信号（1%）和泊松噪声）。
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人类形式的蛋白质被加入到25%牛血清中以代替临床测试样本；通常使用四倍稀释因子以减少免疫测定中的基质效应4。使用数字ELISA检测25%血清中的PSA，从该实验中确定了LOD为~50aM（1.5fg/mL），相当于整个血清中的LOD为~200aM（6fg/mL）。检测到的比较低浓度为250aM，相当于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通过外推背景浓度来确定的加上背景的三个标准差，不同运行的LOD取决于背景的CV。在具有典型背景方差的几个实验中，全血清PSA的亚飞摩尔LOD得以保持。相比之下，一种前列的商业PSA检测方法(ADVIACentaur，西门子）报告在人血清中的LOD为3pM（0.1ng/mL），并且已经报道了LOD在10-30fM17,26。 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品，超敏检测，低至可测试到亚皮克级；
参考原理：血液中单个蛋白质分子的检测有助于识别许多新的诊断性蛋白质标记物。我们报告了一种同时检测数百至数千个单独蛋白质分子的方法，该方法能够检测到非常低浓度的蛋白质。蛋白质被捕获在显微珠上，并用酶标记，每个显微珠上有一个或零个酶标记的蛋白质。通过将这些显微珠分离成50飞米的阵列反应室，单个蛋白质可以通过荧光想象检测到。通过单化这些阵列中的分子，~10-20种酶可以在100μL（~10−19M）中检测到。单个基于酶标记的分子酶联免疫吸附试验（数字ELISA)能够检测血清中临床相关的蛋白质，其浓度（<10−15M）远低于传统ELISA3-5。数字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除术的患者血清中检测到前列腺特异性抗原，比较低至14fmol/mL（0.4fmol）。
超多重检测芯片亚 pg 级灵敏度，5μl 微量进样，适合房水、眼泪等微量样本检测。单分子蛋白数字ELISA产品
多指标高通量数字 ELISA 芯片单个样本可测 2-8 个指标，片内反应检测推动设备小型化。代理数字ELISA高速检测
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从TNF-α数字ELISA测定的检测限为~150aM（2.5fg/mL），相当于全血中的~600aM（10fg/mL）；市场上可用的ELISA对TNF-α的比较高灵敏度在血清中的LOD为21fM(0.34pg/mL）（补充图3）。两种方法的目标蛋白零浓度尖峰均为为这些实验提供有用的阴性对照：25%的血清含有多种蛋白质的微摩尔浓度，在这些高蛋白质背景之上可以检测到非常低浓度的目标蛋白。我们还开发了一个证明用于显示低浓度核酸可以检测到的DNA的主要数字分析方法，而无需复制目标 代理数字ELISA高速检测
