无创产前检查镰状细胞贫血(sicklecellanemia)是HBB基因突变引起的常染色体显性遗传病,有严重的危害,可以导致高达5%的胎儿死亡率及4.62%的孕妇死亡率。而精细有效的无创产前诊断是预防镰状细胞贫血患儿出生的有效方法。研究人员采用dPCR技术检测孕妇胎儿 游离DNA(cff-DNA)HBB基因突变。结果显示,dPCR技术能够确定87%的男性胎儿(n=45)和75%的女性胎儿(n=20)HBB基因的突变状态。当cff-DNA浓度大于7%时,可以**的检测出HBB基因突变[3],可以说是相当厉害了。数字PCR ,就选浚和(上海)仪器科技有限公司,用户的信赖之选,有需要可以联系我司哦!重庆易装拆数字PCR定制
研究方向低丰度及稀有序列的精确定量目前对于低丰度目标序列的检测,定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰,使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下,其重复性就不是很高),而微滴式数字PCR系统通过**的微滴化处理,使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来,从而提高了检测的灵敏度及重复性。此外,由于样品微滴化处理的同时,也将样品中可能存在的***剂进行了分装,提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度,因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言,毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。湖北精密数字PCR售后浚和(上海)仪器科技有限公司力于提供数字PCR ,有需求可以来电咨询!
数字PCR(DigtalPCR)是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段,源于于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中,使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时,加入可检测荧光。待扩增结束时,使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数,从而定量检测样本中的核酸浓度。基于分液方式的不同,数字PCR主要分为3种:微流体数字PCR、微滴数字PCR和芯片数字PCR,数字PCR仪器目前是市场测试校准高的。
数字PCR(dPCR)是近年来引起重视并迅速发展起来的一种突破性的核酸定量分析技术。该技术先将核酸模板进行稀释,分配到大量 的反应单元中,使每个反应单元中只有单个模板分子,然后进行PCR扩增反应,扩增结束后对每个反应室的荧光信号进行统计学分析,来定量DNA拷贝数。数字PCR采用先扩增后定量,因此不依赖扩增曲线的循环阈值(Ct),也无需采用内参基因和标准曲线,准确度高、重现性好,可以实现***定量分析。由于其独特的技术优势,已经在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达分析、环境微生物检测和下一代测序等研究领域显示出巨大的优势和应用前景。数字PCR 浚和(上海)仪器科技有限公司获得众多用户的认可。
相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言,数字PCR具备以下优势:●灵敏度可达到单个核酸分子:检测限低至0.001%,主要系为数字PCR可以实现靶标DNA/RNA的生物浓缩;●无需标准曲线活参照基因进行对比来测定核算量,可对靶分子起始量进行***定量,直接独处DNA分子 的个数;●适合环境复杂样品的检测:终点PCR检测,不依赖Ct值,不依赖扩增效率,能克服PCR 剂的影响,避免样品间的交叉 问题,适合各类复杂环境中的样本进行 定量,如动血样、粪便、尿液、痰液、水样、土壤、植物等;浚和(上海)仪器科技有限公司为您提供数字PCR 。甘肃重量轻数字PCR定制
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定量PCR和数字PCR的特点:1.在20多年的使用和发展中,定量PCR作为一种技术平台,已经产出海量的数据,在工业界和分子检测的某些应用上,定量PCR已经成为“金标准”。基础研究方面,则形成了被称为MIQE的“定量PCR标准实验指南”。2.在定量PCR的各种应用中,基因表达分析(geneexpressionanalysis)的应用比重约占七成,综合各种因素来看,眼下定量PCR还是进行基因表达研究的理想手段。3.上述的“各种因素”具体展开,主要包括:通量、自动化程度、各种检测探针与染料、检测通道、成本和可参考文献与protocol的数目等等。4.就目前市场上已有的数字PCR设备来看,定量PCR在检测的线性范围上具有优势,意味着同一个run内可对各种表达丰度的样品进行分析。重庆易装拆数字PCR定制
数字PCR检测及分析原理在上世纪90年代就被提出来了,但是无奈受限于当时的技术条件,样本稀释及分配都是靠手工来完成的,受到很多因素的干扰和限制;并且结果分析对于研究者来说也十分枯燥与繁琐,因此在很长一段时间dPCR发展停滞不前。后来由于微流控技术与微纳集成制造工艺的发展解决了dPCR过程中的几个关键技术问题,推动了dPCR的研究与商业化的发展。目前根据dPCR样本稀释分配的方式,基本可分为三大类,一种是基于大规模集成微流控芯片;第二种是使用微反应室/孔板;第三种是微滴式。但不论是走芯片式还是微滴式,其基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或者微滴当中,每个反应器的核酸模板数少于...