siRNA,加入HiperFect转染试剂混匀并温育5-10min,将混合物逐滴加入培养皿中混匀,培养细胞直到适当的时候检测基因沉默效果。这个快速操作流程简便到还可以用于“反向转染”,方便至极。当然,习惯用传统方法也是可以的,只要培养到细胞汇合度50%—80%进行转染就可以了。没有禁用血清、***的困扰,HiperFect真的是将实验简化到了***。适合多种细胞类型:HiPerfect可高效转染多种细胞类型,包括HeLa、HeLaS3、HEK293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF等。对于原代细胞,产品手册中列出了转染原代HUVEC、成纤维细胞、角质细胞、上皮细胞和平滑肌细胞的操作步骤,贴心转染试剂--总有一款你想要的.DNA转染试剂哪种好
在难转染细胞(原代大鼠动脉平滑肌细胞)转染效率的比较图片由芝加哥大学肺和重症护理系的NickolaiDulin博士友情提供制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用LipoD293™试剂(左图)和Lipofecatmine2000(L2K,右图)分别将GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染24小时后,用尼康Eclipse2000荧光显微镜检测GFP荧光,以此来评价转染效率。对难转染细胞LNCap细胞转染效率的比较图片由罗斯威尔公园**研究所(RoswellCancerInstitute)的LynGao博士友情提供上海动物转染试剂购买原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖.
转染产品知多少:转染试剂选择工具收录于话题转染是将核酸导入真核细胞中的过程,是细胞生物学、基因表达和基因***实验中的关键步骤。不同的实验方案和技术差别巨大,我们可以利用化学方法或脂质体将核酸(DNA或RNA)高效输送到细胞内,也可以使用电穿孔方法利用电流在细胞膜上开孔,使核酸进入细胞内。赛默飞提供了多种高质量的转染产品,适用于各种细胞类型的转染。如何选择**受信赖的可用于转染的系统,是实验结果的重要影响因素。
胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要!!当然也要保证细胞状态特别好,没有细微污染,铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦!载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统,当然使用三质粒系统的小伙伴居多,一定要选择成熟商业化的载体系统!载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失,或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯:建议目的基因载体和阴性对照GFP载体是同一批,且建议每次包装都如此操作,要保证目的基因的表达载体构建纯化良好,质粒间比例得当,并且对质粒进行酶切验证。用了这个转染试剂,慢***再也不用怕转不进去了!
转染48小时后,使用尼康荧光显微镜GFP荧光进行成像(左侧四幅图),A:LipoD293;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.带有6xHis标记的GFP荧光蛋白使用Ni-NTA亲和柱技术实现分离。5微升洗脱液载入SDS-PAGE凝胶电泳分离并进行Coomassie亮蓝染色(右上图E),道1为LipoD293293、道2为标准蛋白分子、道3为Xfect、道4为293fectin和道5为Fugene6。这四种转染试剂产生蛋白质的效率被进一步定量(见右下图F)。产生慢***的比较通过LipoD293™试剂(升级版)和LipofectamineLTX(LTX)试剂将三个cDNAs共转染进293T细胞。一个GFP载体,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用来测定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T细胞,其次是分别添加不同量的慢定都上清液,1微升(上图)和10微升(下图)。转染试剂快速查找工具上线!基因转染试剂多少钱
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原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖。因此,它们的形态学和生理特征和体内状态更为相似。但相对于连续细胞系,它们通常更难培养和转染。在经过***次传代培养之后,原代培养物变成了一种细胞系。源自于原代培养物的细胞系具有有限的寿命(即它们是有限细胞系),且随着传代的进行,具有比较高的生长能力的细胞逐渐占据支配地位,从而造成了细胞群内的基因型和表型接近一致的情形。相对来说,这一类细胞要比原代细胞使用起来更为方便,尤其是稳定转染的克隆传代...DNA转染试剂哪种好
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