通过传统的酵母双杂交系统,以PtDAL1为诱饵,筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆,10个一组,挑选到1个96孔板的PCR板孔中,获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板,进行PCR扩增,并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物,进行打断后构建二代测序文库,通过NGS测序,获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据,获得阳性克隆基因信息(去冗余后获得135个互作子,包含21个TFs,2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白,部分见表1)。挑选重要的候选基因进行一对一验证(图2)。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白(DIPs)的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析,并对DIPs进行GO注释(图3)。综合生信分析结果,构建针叶树老化途径的调控模型(图4)。酵母三杂交酵母文库数据库。江西实力酵母文库做什么
苹果酵母文库:黄酮醇是一类重要的次生代谢产物,在防治人类**、*******、****血脂、抗氧化、抗病毒、抗过敏等方面发挥着重要作用。苹果除了含有多种维生素之外,还富含黄酮醇,这是"一日一苹果,医生远离我"的重要原因。了解黄酮醇的生物合成调控对改善苹果果实品质、提高苹果营养价值和提高苹果环境适应性具有重要意义。2022年2月,南京农业大学汪良驹团队在国际期刊分子科学上发表了题为“MdSCL8asaNegativeRegulatorParticipatesinALA-InducedFLS1toPromoteFlavonolAccumulationinApples”的研究论文,该研究发现MdSCL8作为MdFLS1的新调节因子,在ALA诱导苹果黄酮醇积累的过程中发挥负调控作用。该项目中所用的苹果酵母文库由欧易生物构建。云南酵母文库领域酵母文库产品线由7个实验室组成,分别有RNA抽提室,RNA质检室、酵母建库室、筛库室等。
酵母单杂交筛选技术:关于HIV想必大家都不陌生,***HIV病毒后潜伏周期长,且目前没有完全的***方法。为了彻底***HIV,不让其发病就要从2方面入手:要么消除潜伏***的细胞,要么防止潜伏原病毒的细胞被***。也就是需要抑制HIV病毒的转录。但是关于HIV在人细胞中的复制、转录和潜伏期调控的分子网络仍不完全确定,所以目前HIV仍不能被**。为了帮助解决这个问题,波士顿大学的研究者,使用酵母单杂交筛选技术,以HIV-1,HIV-2的LTR(启动子和增强子)为诱饵,筛选了人的转录因子文库(包含1086个人的转录因子),**终绘制了调节HIV-1和HIV-2的转录网络图谱,结果发表在2021年的PNAS杂志上。
酵母双杂交文库:疟疾是人类**古老的疾病之一,每年4月25日是世界防治疟疾日,疟疾目前仍是公众健康所面临的**严重威胁之一。基于青蒿素的联合处理法(ACTs)是WHO推荐的比较好处理方案。因发现具有抗疟作用的青蒿素,挽救了数百万人的生命,屠呦呦教授获得了2015年诺贝尔生理或医学奖,从青蒿中分离出的青蒿素被推荐作为抗疟疾的优先药物。之前研究表明,茉莉酸(JA)介导促成的青蒿素积累依赖于光,转录因子HY5也通过参与光信号调控促进青蒿素合成。然而,光与JA相互作用机制及其对青蒿素生物合成调控的潜在机理仍未得到解决。酵母文库筛选研究多年建库与筛选经验验证。
进行了酵母双杂交文库的筛选,结果显示钙依赖的种子特异性蛋白激酶SPK可以与OsNF-YB9相互作用,分段截取互作验证显示OsNF-YB9的N端是互作所必须的(图a-b),并通过双荧光分子互补实验、BiFC、体外GST-pulldown实验得以证实(图c-e)。亚细胞定位显示SPK主要在细胞质中表达,OsNF-YB9在细胞质和细胞核中都有表达,共表达SPK和OsNF-YB9***促进了OsNF-YB9的入核(图f),表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促进了OsNF-YB9从细胞质向细胞核的运输。RT-PCR显示SPK在发育中的种子中高表达,在5DAF开始***,并在10-30DAF维持高表达水平(图a-b)。spk敲除突变体种子中垩白率的增加(图c-e),但粒形和粒重与野生型没有***差别。酵母及其应用ppt课件 酵母及其应用 。江西实力酵母文库做什么
酵母文库酵母双杂交筛库个性化定制研究方案。江西实力酵母文库做什么
酵母单杂交测试:为验证该文库在Y2H和Y1H体系中的有效性,作者以OsMADS1为诱饵筛选水稻转录因子文库,进行了酵母双杂交测试。以Ghd7的启动子片段为诱饵,进行了酵母单杂交测试。结果显示我们的水稻转录因子文库可以有效且高通量的检测蛋白-水稻TF、DNA-水稻TF间的相互作用。另外,该研究中指出,使用该文库筛选鉴定蛋白-TF互作,采用mating法较为方便,即Y2HGold-Bait诱饵菌液与Y187-TF文库菌液一对一杂交。而筛选鉴定DNA-TF互作,采用Y1HGold系统,即Y1HGold-pomoter筛选TF文库质粒更简单高效。此外,可通过降低筛选压力处理,进行弱相互作用的检测。江西实力酵母文库做什么
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