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    msh6全称为mutshomolog6()，是一种错配修复基因，定位于2号染色体的p臂16位上。dna错配修复对于超时遗传信息完整性的维持是非常必要的。微卫星重现性的改变是由于dna复制时铰链不对位产生滑动而导致的结果，又称为微卫星不稳定性。突变型的错配修复基因常表达于高频度微卫星不稳定(msi-h)患者中，与常染色体的显性遗传性疾病相关，称为遗传性非息肉病性结直肠ai(hnpcc)，也可见于散发性(msi-h)结直肠ai患者。错配修复(mmr)蛋白是一组细胞核内酶，存在于所有的增殖细胞内，参与发生了dna复制过程碱基错配的修复。这些蛋白形成复合物(异二聚体)结合于非正常的dna并启动***过程。mmr蛋白的丧失导致增殖细胞中dna复制错误的堆积，特别是位于短重复核苷酸序列基因组的区域，这种现象即为所谓的微卫星不稳定性(msi)，因此，细胞中的mmr蛋白的缺失与微卫星高度不稳定(msi-h)密切相关，与此相反即是微卫星低度不稳定(msi-l)和微卫星稳定(mss)。人类已经认定的错配修复功能的基因有九个，其中五种和临床关系密切，因为在遗传性非息肉病性结直肠ai(hnpcc，又称lynch综合征)中可能发生突变，其中msh6发生频率9％。msh2与msh6形成异二聚体复合物，当msh2缺乏时，msh6蛋白也同样缺失。迈杰转化医学有多年的药企服务经验，紧跟药物研发趋势，熟悉新药研发动向。江西专业dMMR抗体检测试剂诚信合作

    结直肠ai是我国**常见的消化系统恶性**之一，据2019年中国ai症中心公布数据显示，结肠ai在我国恶性**中发病率*次于肺ai及胃ai，位列第3位，其死亡率居于第5位。结直肠ai的发生、发展、浸润、转移是一系列分子基因参与、多步骤调控的极其复杂的机制，此过程常与细胞失控性增殖、逃脱凋亡有关，涉及原ai基因***（常见有为C-myc基因、Ras基因及EGFR等）、错配修复基因突变（HMSHI、HLH1、PMS1、PMS2、GTBP）、抑ai基因失活（常见的有p53基因、DCC基因、APC基因等）以及一些危险修饰基因（如COX-2、CD44等）。基于CRYSTAL研究，KRAS基因成为了结直肠ai患者抗EGFR靶向***前必须检测的较早分子标记物，自此开启了结直肠ai基于分子亚型靶向***的里程碑，随后BRAF、MSI/MMR、PIK3CA等基因丰富了结肠ai的基因检测。在个体化******开展的***，了解结直肠ai中基因突变的分布，并结合患者临床一般情况进行分析，在接受术后辅助化疗的患者中评估相关基因的预后指导意义，对于研究中国人群特有的基因频谱特征和筛选适宜预后分子标志物都具有重要的参考价值。一、RAS基因RAS突变主要发生在KRAS第2号外显子的12、13密码子，在结直肠ai患者中KRAS第2号外显子的突变率在40%左右。湖北提供dMMR抗体检测试剂郑重承诺MSH2抗体试剂 苏苏械备20180568号.

    当liu细胞出现一种或几种错配修复蛋白核表达的丢失，则提示liu为MSI-H。MLH1和MSH2作为错配修复复合体的共用亚单位，在发生功能缺陷时常同时伴有其同源错配修复蛋白的表达缺失。另外，如前所述，部分Lynch综合征是由于EpCAM基因胚系突变导致下游MSH2基因功能缺陷所致。Musulen等发现，在MSH2表达缺失的liu中检测出EpCAM蛋白缺失，与EpCAM基因突变的吻合率达100％，所以推荐将EpCAM免疫组织化学检测加入到Lynch综合征的筛查流程中。日常工作中用于鉴别肺腺ai与恶性间皮瘤的抗体Ber-EP4即是检测EpCAM的常用克隆之一。免疫组织化学检查错配修复蛋白表达缺失的作用如下：(1)提示哪个错配修复基因发生了功能缺失(表1)；(2)与MLH1启动子甲基化检测和／或BRAFV600E突变检测结合，区分散发性MSI-H结直肠ai和可疑Lynch综合征患者；(3)与EpCAM免疫组织化学检查结合，为后续的Lynch综合征遗传学突变检测提示方向。目前，4种主要的错配修复蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均已有稳定的商品化抗体，但受组织固定、染色条件、抗体克隆号不同等因素的影响，可能会出现假阳性或假阴性结果。在判读免疫组织化学染色结果时应注意：(1)内对照是否阳性；(2)着色部位是否为细胞核；。

    筛选出分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞株abm58060-20a2-pu。将此细胞株转入t-75培养瓶中扩增至对数生长期保种或进行后续实验。实施例3腹水诱生法制备单克隆抗体一、腹水制备对数生长期细胞用无血清培养基洗涤并悬起，计数～5×105，1ml。悬浮的细胞腹腔注射事先用石蜡油致敏的小鼠。7天后开始收集腹水。取出的腹水于4℃离心4000rpm，10min。小心吸出中间的腹水收集于离心管中，4℃或-20℃保存。二、单克隆抗体的纯化用hitraprproteinaff(ge公司)亲和层析法按说明书从腹水中纯化抗体。sds-page胶鉴定纯度，bradford法测定浓度。纯化的抗体保存于-20℃。实施例4单克隆抗体特性鉴定一、亚型鉴定用100mmpbs()稀释包被羊抗鼠igg(北京中杉金桥生物技术有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，过夜。倾空液体，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封闭液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。倾空液体，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。倾空液体用pbs-t清洗3次。用封闭液1：1000稀释hrp标记的羊抗鼠(κ,λ)抗体或1：2000稀释hrp标记的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗体，37℃孵育1h。倾空液体，用pbs-t清洗3次。迈杰转化医学与全球品牌药企广f泛展开伴随诊断产品的开发合作，已有多个诊断产品上市。

MSI和dMMR检测的临床应用

•实体瘤免疫(PD-1和CTLA-4)患者的选择

•2017年5月23日，美国FDA批准了默克公司的Keytruda（pembrolizumab）应用于高度微卫星不稳定性（MSI-H）或错配修复缺陷（dMMR）的实体liu患者

•2017年8月1日，FDA批准百时美施贵宝的Opdivo（nivolumab）可应用于***氟嘧啶，奥沙利铂和伊立替康***后疾病进展的MSI-H或dMMR的转移性结直肠liu患者

•MSI和dMMR的传统临床应用

•用于结直肠liu和子宫内膜liu患者林奇综合征（HNPCC）的筛查（98%美国临床实验室）

•用于结直肠liu患者的预后指标，MSI-H患者预后较好（美国临床实验室占48%）

•作为结直肠liu患者辅助化疗(5-FU和Irinotecan)的用药指导 【迈杰转化医学】开发的dMMR抗体检测试剂,检测费用低,技术成熟,临床易开展。江苏定制dMMR抗体检测试剂共同合作

使用北欧免疫组化质控中心NordiQC推荐的IHC抗体组合。江西专业dMMR抗体检测试剂诚信合作

    具有两个或两个以上位点改变)、低频MSI(MSI-L，*有一个位点发生改变)以及微卫星稳定型(MSS，没有位点发生改变)。由于MSI-L结直肠ai在临床表现和病理改变上与MSSliu无明显差别，因此通常被归入MSSliu。约15％的结直肠ai经MSI途径发生，其中3％左右为家族遗传性(Lynch综合征)，12％为散发性。二、遗传性MSI-H结直肠ai(Lynch综合征)与散发性MSI-H结直肠ai1．Lynch综合征与散发性MSI-H结直肠ai发生机制的异同：作为经MSI途径发生的结直肠ai的典型**，Lynch综合征**初由Michigan大学病理系的Warthin博士于1913年**先发现并报道，至1966年Lynch医师明确了本病是一种常染色显性遗传的liu综合征，在迄今100年的发现和研究过程中，“ai症家族综合征(cancerfamilysyndrome)”、“Lynch综合征”、“遗传性非息肉病性结直肠ai(hereditarynon．polyposiscolorectalcancer)”等名称曾先后在不同时期被使用。随着近年来错配修复基因在本病发生中的作用逐渐明确，现在WHOliu分类将Lynch综合征这一名称用于携带有错配修复基因胚系缺陷的常染色体显性遗传性liu综合征。目前在Lynch综合征患者中发现的DNA错配修复缺陷包括三种类型：(1)错配修复基因的胚系突变。江西专业dMMR抗体检测试剂诚信合作