磷酸化蛋白的WB第三方检测有哪些方法呢?50 度水浴 30min 后,用 TBST 洗 5 分钟 ,3 次即可去除已孵育结合的抗体。许多人会建议 55 度水浴 30min。Strip solution 是用来去除已结合的抗体,但也会去除部分的蛋白,导致蛋白信号变弱。我本人经实验发现水浴时有时温度不稳定,温度定为 55 度时往往其温度容易超过,导致较多的蛋白也被去除,故建议温度设为 50 度 30min ,既能有效去除已结合的抗体,又比 55 度更能保护蛋白。Strip 时一定要注意: membrane 一定要完全泡在 strip solution 中(可用较硬的塑料膜封好),然后要完全浸入水中,使受热均匀 。这一点很重要,要不然,随后压出来的总蛋白也好,内标也好就会不均一,无法进行比较。我曾将同一张membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次,分别压不同的抗体(因为有时候蛋白分子量很接近),效果都不错。瑞普信生物技术有限公司第三方检测数据靠谱吗?西藏细胞计数第三方检测
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磷酸化蛋白的WB第三方检测在实操过程中有哪些注意事项?细节决定成败,在科研中更是如此。1.一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使band压出来也会很浅,结果也不可信。2.加一抗后比较好4度过夜,保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。二抗则室温1小时即可。3.磷酸化抗体的好坏是一个关键因素,所以要选择好的厂商。务必找专业的磷酸化抗体公司订购。4.比较好根据厂商的protocol来操作实验,这是实验成功的保证。5.抗体的稀释倍数也要适当。不同厂商也会有不同要求。瑞普信生物技术有限公司第三方检测基础实验服务商。
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