HE染色常见问题:Q3:细胞核染色过浅,颜色暗淡答:切片在苏木素染液中停留过短,或苏木素过度氧化失效,或分化时间太长。对策:重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液,每个3-5min即可,接着重新染色。可以适当地组织的嗜碱性以增强核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3h,自来水冲洗5-10min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h,自来水冲洗10min染色。Q4:细胞核染色过深,胞浆着蓝色答:切片在苏木素染液中停留过长;或切片太厚;或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度(比较好厚度1-2层细胞核),要么重新染色,要么重新制片。南京英瀚斯,专业的病理染色实验服务平台。HE染色原理 试剂 染色步骤 注意事项 。西藏靠谱的HE染色服务
HE染色脱蜡不净的原因及验证方法:1)二甲苯使用过久,含蜡成分太高或脱蜡效果差:可更换二甲苯验证。2)切片经烤片,冷却后放入二甲苯脱蜡或室温太低;延长拖拉时间或用热的切片脱蜡验证。3)脱蜡时间太短或振荡太少,幅度太小;可延长脱蜡时间或以多振荡来验证。4)洗涤二甲苯用的乙醇使用时间过久,导致乙醇中二甲苯含量过高,二甲苯残留在切片上(由于二甲苯与水不相溶,切片上有二甲苯的地方,苏木精就没有办法渗透进去,在切片染色完成后留下了点状的不着**域):更换各道乙醇验证。5)二甲苯、乙醇质量不佳(偶有试剂瓶内装的试剂与试剂名不相符):换批号验证。6)更换脱蜡液体时试剂拿错:需重新配置验证。7)更换脱蜡液体时试剂次序放错:需重新配置验证。8)烤片时间短,切片上水分没有烤干,也会导致着色不匀,出现点状发白区域。四川比较好的HE染色检测冰冻组织切片的HE染色。
HE染色骨组织的处理方式:组织里存有钙盐可妨碍用常规方法制作良好切片。骨组织及钙化病灶,经过固定后,需要先将钙盐除去使组织软化,才能进行常规切片。如果脱钙不全,则切片容易撕开或碎裂,损伤切片刀刀刃。脱去钙盐的过程,称为脱钙。骨组织固定24小时后,锯下不超过0.5cm厚的薄骨片,以4%甲醛溶液固定后,进行脱钙。骨组织过厚则需延长脱钙时间,但长时间浸于强酸会影响切片染色效果。取材骨组织固定于10%甲醛溶液24小时后再锯取厚度约0.5cm骨片固定以10%甲醛溶液固定2天脱钙将组织置于脱钙剂中,每日更换新鲜液,直至组织软化为止除酸流水冲洗24小时脱水、浸蜡、切片进行常规脱水、透明、浸蜡、切片南京英瀚斯,专业的病理染色实验服务平台。
HE染色常见问题:切片染色不均匀,有片状的弱着**存在答:(1)取材时组织太厚,固定过久,导致深部组织固定不佳,而表浅组织过度固定,而透明、脱水、浸蜡均是如此,这样在后期染色时就会出现染色不均匀。应该将厚的组织剖开固定。(2)制片过程有问题,切片厚薄不一,或者有刀痕,或组织与玻片间存在气泡。同一张切片厚薄不一,一般都是在制片时,刀片固定不佳或刀片钝或刀片与组织角度不佳(一般比较好角度为5°)(3)脱蜡前未烘烤,脱蜡时间过短或脱蜡液使用过久,导致脱蜡不彻底。(4)染色液过少,着色不均匀;或染色时部分组织干涸而另一部分湿润,这样会导致组织吸附染料的能力不一。(5)分化不当。南京英瀚斯,专业的病理染色实验服务平台。HE染色是病理实验中比较用的一种基础染色方法。
HE染色显微镜下见切片内有大量水珠分析以及应对原因:切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水,导致二甲苯透明中性树胶封固后残留大量水分。对策:移去盖玻片,用二甲苯溶解封固剂如中性树胶。将切片置入新鲜的无水乙醇中,待切片重新脱水完全后,用新二甲苯透明,中性树胶封固。所有用于脱水和透明的液体,在使用一定时间以后,应即时更换。光镜下切片某些区域难以聚焦分析以及应对原因:盖玻片上可能有封固切片的封固剂。对策:移去盖玻片,重新用干净的盖玻片封片HE染色,即是苏木精-伊红染色法,是形态学比较常用的染色方法。四川比较好的HE染色检测
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HE染色标本一般是针对石蜡标本,脂滴和石蜡都是的有机物, 都具有非极,脂滴应该可以溶解石蜡的。 HE染色就是用苏木精和伊红对细胞内的核糖体和细胞质染色的方法。 H:Hematoxylin,苏木精 E:Eosin,伊红 苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱染料染色的结构具有嗜碱。 伊红(,E)是一种酸染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸染料染色的结构具有嗜酸。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,***入蒸馏水,就可染色。南京英瀚斯生物西藏靠谱的HE染色服务