外泌体富含蛋白质、脂质和核酸分子,这些分子具有来源细胞的特异性,所以通过分析中流细胞所释放的外泌体分子特征就可部分反映其来源细胞表型及其生物学作用。现已发现多种中流外泌体来源的蛋白类分子标志物。例如,乳腺ai、结肠ai和胰腺ai中均可检测到磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(glypican1,GPC1)的表达,且与乳腺ai和结肠ai相比,GPC1对胰腺ai的早期诊断尤具价值。前列腺ai患者血浆外泌体中凋亡抑制蛋白的表达增高则提示与中流进展相关。随着蛋白组学技术的发展,研究发现中流患者血液外泌体来源的蛋白标志物其诊断特异性和敏感性分别可达到95%和90%。肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞),都可以产生并释放外泌体。安徽植物组织外泌体wb检测
通过改变外泌体的溶解性或者分散性, 可以将它们从体液或细胞培养液中沉淀出来。常见的方法是使用聚乙二醇或凝集素来沉淀样品中的外泌体。聚乙二醇是一种水溶性非离子化合物, 不含水的聚乙二醇可以通过“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力, 从而迫使其脱离溶液, 进而在低速离心条件下发生沉降。凝集素是一种具有高度特异性的碳水化合物结合蛋白, 可通过与外泌体质膜糖蛋白上的糖链结合来改变外泌体的溶解性。此外, 还可使用鱼精蛋白、醋酸钠、有机溶剂沉淀等方法进行沉淀分离。河北植物根组织外泌体免疫磁珠捕获法提取外泌体简单省时且分离纯度较高,可用于临床。
目前市面上开发的外泌体提取试剂盒,是根据外泌体表面由类似于细胞膜的脂质双分子层具有一定疏水性这一特性,用试剂捆绑水分子,从而可通过常规离心收集沉淀获取外泌体。这种快速提取外泌体的方法虽简便快捷、样本需求少、对设备要求低,但与差速离心方法类似,其分离得到的沉淀包含其他细胞分泌的囊泡,且血清中含有大量血清蛋白分子,成分复杂,很可能掺杂一些未知的疏水大分子物质。Sabapatha等曾根据来源于胎盘的外泌体表面特异表达***P这一特性,使用耦合到磁珠的抗***P抗体,采用磁珠分选方法分离血浆中胎盘来源外泌体。此法可以提取的胎盘外泌体量少,不适用于大规模提取制备,且免疫磁珠价格昂贵,不利于提取技术的普及。
由于特殊的结构和循环方式,外泌体作为药物运输的载体具有独特的优势。例如外泌体的尺寸分布能够增强渗透滞留效应,从而有选择性地深入中流组织;其外层磷脂双分子层可以保护内容物不受各种生物酶的影响,维持各种生物分子的活性;外泌体普遍存在于各种体液和组织中,其体积小,结构、组成与细胞膜类似,导致外泌体可以在避开免疫系统监督的同时深入组织内部,有较好的生物相容性;当采用内源外泌体时,能明显降低其他药物载体可能引起的有害免疫反应;除此之外,某些细胞来源或经特殊修饰过的外泌体具有良好的特异性,可以与特定的qi官或组织结合。蔗糖密度梯度离心法根据不同物质密度分离外泌体,所获得外泌体纯度较高,但耗时、产量低。
外泌体作为疾病诊断的标志物具有其独特优势:(1)与正常细胞相比,病变细胞产生的外泌体在分泌量和内容物方面存在明显差异。病变的细胞和组织能够产生更多外泌体。(2)由于特殊的生成方式,外泌体的组成不同于来源细胞。其内包含的一些特异性蛋白质能够揭示外泌体的起源、结构和运输方式,有利于深入了解外泌体的产生机制。(3)病变细胞分泌的外泌体通过胞吐的过程进入血液、尿液等体液,囊泡状结构能够保护外泌体内部生物分子不受体液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干扰,有利于保持其结构完整和生物活性,通过对此类体液进行分析可以实现疾病的无创或微创检测。透射电子显微镜分辨率可达0.1-0.2 nm,可将被观察物放大数百万倍,是外泌体双层囊膜结构观测的经典方法。浙江海洋生物组织外泌体提取
双层囊膜结构(茶托状)是外泌体重要标志之一,但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。安徽植物组织外泌体wb检测
circZKSCAN1在肝ai细胞中低表达且抑制肝ai细胞的增殖,ciRS-7则被认为是非小细胞肺ai、结肠ai和胃ai等中流的预后指标,其高表达与较高的临床分期和较差的总体生存期相关。目前已发现组织、血液和外泌体中的circRNA分子表达失调,而多种circRNA的联合检测会提高外泌体标志物的敏感性和特异性,甚至可达到90%左右。外泌体可作为纳米载体来介导细胞间的信息传递,发挥信息传递作用的方式主要有:在细胞间转移受体,通过配体受体介导的方式作用于受体细胞,向受体细胞转移功能蛋白,通过膜融合方式向受体细胞传递mRNA、miRNAs或转录因子等信息。这些方式为中流靶向zhiliao开辟了新的途径。安徽植物组织外泌体wb检测
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