Blinatumomab(一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子)的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明,所有三个连接子区域均被消解,α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰,α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化,表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比,四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体,剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中,α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离,导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如,在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外,240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。消化在1小时内完成,且具有特异性。即使孵育时间延长,也没有过度消化的风险。云南FabULOUSIdeS蛋白酶抗体酶切
抗体由于其大小和复杂性,是一种难以表征的分子。偶联药物有效载荷是对抗Ai症等疾病的一种有吸引力的方法,但进一步增加了异质性的复杂性和风险。抗体药物偶联物 (ADC) 需要像任何其他基于 IgG 的生物制药一样进行仔细和详细的表征,并且需要适当的分析工作流程。Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶将ADC消化成其亚基,可以详细表征这类复杂的药物。Genovis的内切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 还可以研究完整的 ADC,但降低复杂性并提高分辨率。吉林GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶Genovis酶的适应于克隆筛选,工艺开发和验证以及稳定性研究,也适用于受控环境中的批次放行方法。
Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)试剂盒可消化兔 IgG,但要在亲和步骤中捕获 Fc 片段,您需要另一种填料,而不是试剂盒中通常包含的 CaptureSelect™ Fc。如果您对处理兔IgG感兴趣,请联系Genovis团队,我们将在FabRICATOR Fab2试剂盒中提供与兔Fc相容的树脂色谱柱。使用FabRICATOR的抗体消化的简单性、速度和可重复性也意味着这种酶可以被用于质量控制应用。 QC方法需要执行简单,易于训练,高度可重复,数据易于分析,这正是您使用FabRICATOR所得到的。 因为它适用于一系列不同的IgG,这也意味着使用FabRICATOR进行QC工作的客户将能够在未来的产品中使用它。 这显示了这种酶在抗体消化中是多么的有效。
IgA 消化酶的 IgASAP 家族特异性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特异性消化人 IgA1,而 IgASAP Sub1+2 同时消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特异性消化铰链上方的 IgA1 和 IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的 Fab 和 Fc 片段。为了获得纯和完整的Fab片段,使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit进行人IgG1的消化和抗体片段的后续纯化。通过与 GingisKHAN 孵育,然后在 CaptureSelect™ 人 CH1 离心柱上亲和纯化,在曲妥珠单抗上证明了完整的片段生成。样品的酶和Fc部分存在于色谱柱的流通中,Fab很容易通过降低pH洗脱。使用该试剂盒,可以制备 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同时提供IdeS酶的纯化试剂盒。在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1,产生完整的 Fab 和 Fc 片段。
与IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小时内完成,并且由于酶的特异性,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。该酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。活性是在37°C下,但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgASAPSub1是从口腔链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为148kDa。IgASAPSub1冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。Genovis发现更多的缓冲液与FabRICATOR活性兼容。浙江GingisREXIdeS蛋白酶蛋白组学
可用于如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化等。云南FabULOUSIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis提供具有低水平内Du素的FabRICATOR(IdeS)冻干酶,用于IgG的铰链以下消化。FabRICATOR(IdeS)是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶,可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体,产生均质的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以冻干粉的形式提供两种不同规格:2000和5000单位,分别用于消化2mg或5mgIgG。该产品配方每瓶的内Du素含量较低,2000单位小瓶的内Du素含量为<0.04EU/瓶,5000单位小瓶的内Du素含量为<0.10EU/瓶。有效消化,内DU素水平低;适用于灵敏的体内或基于细胞的检测。云南FabULOUSIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis提供具有低水平内Du素的FabRICATOR(IdeS)冻干酶,用于IgG的铰链以下消...
【详情】其他基于 IgG 的生物制药需要仔细表征和监测关键质量属性,例如氧化、糖基化和其他翻译后修饰。与抗体...
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【详情】与IdeS不同,度拉糖肽由两个胰高xue糖素样肽-1 (GLP-1) 分子组成,它们通过柔性 GS ...
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【详情】蛋白酶用于生成肽,用于质谱分析蛋白质。这些应用包括蛋白质组学和生物制药的深度表征。由于遗漏了切割和样...
【详情】样品制备的条件可能会在样品中诱发伪影,因此需要避免高温和碱性pH值进行质谱分析。如果可能的话,避免多...
【详情】经过多年的经验积累及市场积淀,倍笃生物已组合多条不同产品线,分别满足体外诊断、organoid及干细...
【详情】用于IgA1和IgA2m1以上铰链消化的冻干酶。与IdeS不同,Genovis提供的IgASAPSu...
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