武汉BD单细胞多组学测序服务

二代测序技术在测序方法上取得了重大突破，基于“边合成边测序”（sequencingbysynthesis）和大规模平行测序技术（massiveparallelanalysis,MPS），使测序通量和读取速度得到极大提升，烈冰生物斥巨资购置的Novaseq6000测序仪的测序原理可以简化为四步：样品文库构建、簇生成、测序和数据分析。由于读长限制，样品DNA或由RNA逆转录得到的cDNA需要被打断成300-500bp的片段，并在3和5端接上3种序列：1）Index，用于区分样品来源；2）Adapter，用于结合测序通道上的位点；3）Primerbindingsite，用于结合PCR引物启动扩增反应。烈冰专精单细胞多组学测序领域。武汉BD单细胞多组学测序服务

基于桥式PCR技术的簇生成可以将模版链迅速扩增成千上万倍，保证过程中足够的测序深度。测序时使用特殊标记的dNTP：1）碱基上通过敏感键修饰上不同的荧光基团，用于区分ATCG；2）3端使用叠氮基团封闭，保证一次循环只上一个dNTP。每一轮循环结束时，会通过高速荧光显微镜记录荧光图像，再通入试剂除去荧光基团和叠氮基团，开启下一循环。通过分析读取同一位点的荧光，实时获取模版链的碱基序列。由于过程中使用的化学反应并不可控，随着循环数的增大会出现不同步的情况，因此Illumina的读长只能限制在200bp左右。北京高通量测序单细胞多组学平台深度的单细胞测序数据解读助力生物健康医疗时代。

对于单细胞测序而言，常常需要先构建细胞图谱，在此基础上再开展后续各项分析，并且数据分析时以细胞聚类（cell cluster）为讨论对象，而不是像常规Bulk测序一样以组别为分析对象，因此单细胞测序项目对样本入组要求没有Bulk测序那样严格，但是单细胞测序，特别是目的为图谱研究时，需要通过提高样本复杂度（增加样本数），尽可能的构建某一疾病类型、群体细胞图谱信息。因此，单细胞测序实验设计时首先需要保证生物学重复，不同样本来源的样本建议单独进行细胞解离和捕获、建库、测序，以保证捕获到足够的细胞数，单个样本分别捕获细胞时，后续分析除了整体分析以外，还可以做单样本分析，保证分析的完备准确性。

烈冰与国内高校、研究所、医院和药企单位开展深度合作，服务于600+临床与研究机构，1000+客户和5000+重要科研项目，助力并联合发表300+篇CNS等国际学术期刊（不完全统计），在单细胞领域，烈冰助力用户发表单细胞文献30+篇，总IF＞300+，IF＞10+以上文章占比65%以上，包含Immunity、NatureCellBiology、NaturePlants、AdvancedScience等生物领域国际主流学术期刊，已发表文章研究领域涵盖包括COVID-19研究、疾病发生转移机制，免疫研究、脑神经、白血病、胚胎发育、糖尿病、退行性疾病和植物领域研究等。随着单细胞多组学的不断进步, 研究者将有机会在单细胞分辨率下进一步理解个体发育以及疾病发展机制。

当蜂巢孔内同时落入细胞和磁珠后，接下去可以往BDCartridge板中加入细胞裂解液对细胞进行裂解，使细胞内的RNA与磁珠上的标签进行结合，完成每个细胞内RNA的捕获和标记。这时，再将捕获了RNA的磁珠进行回收，待所有质控结果确认通过后就可以进行后续的RNA反转录、cDNA第二链合成等实验操作。而BDCartridge板则需要再进行一次成像，获得磁珠收集后的扫描图，判断磁珠是否已经被有效收集。根据每一步的质控结果，烈冰科技（NovelBio）单细胞测序实验团队会根据单细胞分选的实验结果生成实验总结报告，判断每一步骤是否通过质控，并得到捕获的单细胞数量以及双细胞比例，对整个实验进行总结评估。若所有过程通过质控，实验样本即可进行下一步实验操作。多组学技术结合了不同的生物数据集，如基因组学、转录组学和蛋白质组学。烈冰单细胞多组学平台

单细胞转录组技术在多个研究领域都发挥了重要的推进作用，揭示了组织中微量的细胞类型和基因表达特征。武汉BD单细胞多组学测序服务

烈冰生物生信分析团队紧追国际前沿、整合添加多项国际期刊认可的空转分析工具，构建一套完整的数据分析流程；精心研发空转结果浏览器，可同步展示空间转录组与单细胞测序分析结果，详细深入地解析空间转录组数据。完成从Rawdata（原始数据）到Spot-Gene的具有定位信息的表达矩阵的过程后，就进入了空转的第二步，去进行Spot的Cluster的过程，熟悉单细胞测序的研究者知道，Cluster在单细胞测序中往往表示为细胞的类型，也就是说能聚在一起采用算法分为一个群体细胞是一个Celltype（当然分情况也会有不同）。而在空转中，也正是由于前面提到了细胞的非单一性，导致了这里的分群并不是单纯的同一细胞类型，而应该认为是具有相同细胞组成的点阵区域，或者说是近似的组织结构区域。武汉BD单细胞多组学测序服务

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