T5核酸外切酶在基因克隆中的优势主要体现在以下几个方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依赖性组装(TEDA)方法在常规克隆中的效率与使用专有DNA聚合酶的商业In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA连接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每个反应使用0.04U的T5核酸外切酶,价格为0.25美分,具有很高的成本效益。3.**简单性**:TEDA方法的反应混合物非常简单,易于操作,这使得它在预算有限的实验室中尤其有用。4.**灵活性**:TEDA方法能够组装多个DNA片段,并在多个位点同时进行定点诱变,提供了一种灵活的克隆和突变方法。5.**阳性克隆率**:使用T5核酸外切酶的无缝克隆技术可以确保100%的阳性克隆率,这提高了实验的成功率。6.**协同作用**:在无缝克隆中,T5核酸外切酶与Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA连接酶协同作用,通过切割、填补和连接三个步骤,高效地完成DNA片段的连接。7.**减少污染**:T5核酸外切酶可以降解碱裂解提取质粒中的变性DNA,减少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和转染效率。这些优势使得T5核酸外切酶成为基因克隆中一个非常有价值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作简便的实验环境中。Ultra-Long Master Mix 在分子生物学实验中的应用主要集中在需要扩增长片段DNA序列的场合。Recombinant Human SEMA7A Protein,His Tag
ExoIII(ExonucleaseIII)和Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在DNA末端处理上的主要不同点如下:1.**作用方向**:-**ExoIII**:具有3'→5'外切脱氧核糖核酸酶活性,它从DNA链的3'-OH末端逐步切去单核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**:是一种5'→3'核酸外切酶,能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**底物特异性**:-**ExoIII**:适底物是平末端或5'末端突出的DNA,但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性,因此难以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**:适底物是5'磷酸化的双链DNA,对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**活性差异**:-**ExoIII**:对具有3'-突出末端(至少有4个碱基,且具有3'-末端C残基)的DNA、单链DNA、硫代磷酸酯连接的核苷酸无活性。-**Lambda核酸外切酶**:对5'-OH端的切割速度比5'-P端慢约20倍;对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。4.**应用场景**:-**ExoIII**:可以用于生产特定方向的单链DNA,将线性化DNA设计成为一端为不切割末端(3'突出端),另一端则设计为易切割末端(平端或5'突出端)。
T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因编辑中的应用主要体现在突变体检测和基因编辑效率评估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具体应用步骤和特点:1.**基因编辑效率评估**:-T7EI用于评估CRISPR-Cas9在给定的导向RNA靶位点上对细胞群体进行基因编辑的效率。-通过PCR扩增围绕CRISPR导向RNA靶位点的基因组DNA,如果CRISPR-Cas9介导的非同源末端连接(NHEJ)修复事件引入了突变,变性和退火将形成突变型和野生型PCR扩增子的异源双链DNA。2.**突变体检测**:-如果CRISPR/Cas9编辑成功在DNA上引入突变,则可与野生型DNA片段退火产生异质双链DNA。T7EI可以识别该DNA上的不完全配对的DNA位点然后进行双链切割,通过琼脂糖凝胶电泳即可显示酶切后的条带,从而半定量判定基因编辑效果。-T7EI能识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA,不能识别1bp的插入、缺失或突变。3.**实验步骤**:-收集细胞并提取基因组DNA,然后使用PCR扩增期望编辑的基因组区域。扩增子的长度建议为0.5-1kb。-对扩增的DNA进行变性和退火复性,以产生异质双链DNA。-使用T7EI酶处理退火后的DNA产物,在37℃孵育15分钟。
磁珠法DNA凝胶回收试剂盒是一种用于从DNA琼脂糖凝胶中回收特定DNA片段的实验室工具。与传统的柱纯化方法相比,磁珠法具有多个优势:1.**操作简便快捷**:磁珠法DNA凝胶回收试剂盒的操作步骤通常包括凝胶的融化、DNA的结合、磁珠的洗涤和DNA的洗脱,整个过程可以在20分钟内完成。2.**高纯度和高回收率**:磁珠法能够稳定、高效地从凝胶中回收DNA,纯化所得的DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。通常回收率达到60-80%,对于200bp以下小片段和10kb以上大片段的回收率有所下降。3.**适用性广**:适用于100bp以上DNA片段的纯化,对达到10kb片段DNA的纯化也能保持较好的效果。4.**安全性高**:操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂,更加环保和安全。5.**灵活性**:可以根据实际状况灵活调节磁珠用量,适应不同体积和浓度的样品处理。6.**自动化和高通量**:磁珠法纯化试剂盒适合手工操作,也可用于自动化工作站或核酸自动提取仪,实现高通量操作。Cas12a同源物能够识别更简单的PAM序列(如5-TTN),这使得基因组的覆盖率显著提高。
BstDNA聚合酶在等温扩增中的优势主要包括以下几点:1.**高灵敏度和扩增效率**:BstDNA聚合酶具有链置换能力,能够在恒温条件下快速、高效、特异性地扩增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase灵敏度超高,低至5copies目的基因可测,且始终能比竞品更快达到阈值,扩增速率更快。2.**高dUTP耐受性**:BstPlusDNAPolymerase具有较高的dUTP耐受性,在反应体系中添加dUTP对BstPlusDNAPolymerase的灵敏度及扩增效率无影响,这使得它在防污染系统中表现出色。3.**快速扩增**:使用BstDNA聚合酶的等温扩增技术,如LAMP,可以在15-60分钟内实现109-1010倍的扩增,显示出快速的扩增能力。4.**热稳定性**:BstDNA聚合酶具有较强的热稳定性,能在60-65℃的恒温条件下保持活性,这使得它非常适合于不需要温度循环的等温扩增技术。5.**简化的反应设置**:Bst3.0DNAPolymerase优化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反应,简化了反应设置,可以实现单酶RT-LAMP反应。6.**抗抑制剂能力强**:Bst3.0DNAPolymerase即使在高浓度的扩增抑制剂中,包括dUTP,也能展现出强大的性能。
泛素分子可以通过其内部的赖氨酸残基(如Lys48)与其他泛素分子形成多聚泛素链。Recombinant Human SEMA7A Protein,His Tag
重组Exendin-4在科研方面的作用主要体现在以下几个方面:1.**糖尿病研究**:重组Exendin-4作为一种GLP-1受体激动剂,其在2型糖尿病(T2DM)方面具有的疗效,能够模拟GLP-1的作用,增加胰岛素的分泌,抑制胰高的血糖素的分泌,从而降低糖水平。2.**药物开发**:Exendin-4的结构和功能特性使其成为开发新型糖尿病药物的重要候选物质。科研人员通过基因工程方法构建长效融合蛋白,以延长Exendin-4的半衰期,提高其效果和降低生产成本。3.**分子机制研究**:科研中对Exendin-4的作用机制进行了深入研究,包括其对胰岛β细胞的作用、对神经系统的保护作用,以及其在胰岛移植受者中增加胰岛素分泌量的效果。4.**生物合成研究**:通过生物工程技术,如基因序列优化和密码子改造,提高Exendin-4在宿主细胞中的表达效率,以及通过纯化工艺提高其纯度,为临床应用提供基础。5.**药理作用及机制研究**:Exendin-4的药理作用及其机制是科研关注的重点,包括其对胰岛素分泌的影响、对胰岛β细胞增殖和凋亡的调控,以及其在减缓胃排空和抑制食欲方面的作用。Recombinant Human SEMA7A Protein,His Tag
5× RNA Loading Buffer:RNA电泳中的关键试剂5× RNA Loading Buffer 是一种为RNA凝胶电泳设计的即用型试剂,广泛应用于RN片段的分离和分析。它通过添加特定的染料和高密度成分(如甘油或蔗糖),使RNA样品在电泳过程中更容易沉降并被观察,是RNA研究中不可或缺的工具。产品特点高密度与染料标记:5× RNA Loading Buffer 含有高浓度的甘油或蔗糖,能够使RNA样品在电泳时沉降于凝胶孔底部,避免漂浮。同时,其中的染料(如溴酚蓝或二甲苯蓝)可以指示RNA迁移的位置,便于实时观察电泳进程。即用型设计:无需额外配制,直接与RNA样品混合即可使用,简化了...