重组增强型绿色荧光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一种用于生物科学研究的工具。以下是重组EGFP的一些特点和应用:1.**高荧光强度**:EGFP比野生型GFP具有更强的荧光,这使得它在成像和检测时更为敏感和有效。2.**改进的折叠效率**:EGFP在生理温度(如37℃)下的折叠效率更高,这有助于在细胞内快速形成成熟的荧光蛋白。3.**单一激发峰**:与野生型GFP相比,EGFP具有单一的激发峰,这简化了成像条件的设置,并提高了信号的稳定性。4.**适合多种生物系统**:EGFP可以用于多种生物系统,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞。5.**多功能性**:EGFP可以作为报告基因用于基因表达分析,也可以作为融合标签用于蛋白质定位和动态研究。6.**非糖基化**:在大肠杆菌中表达的重组EGFP是非糖基化的,这有助于减少翻译后修饰的复杂性。7.**纯度高**:重组EGFP通常具有高纯度,适合用于各种生物化学和分子生物学实验。8.**稳定性**:EGFP的荧光稳定性好,适合长时间观察和成像。9.**分子量**:重组EGFP的分子量约为26.9kDa,由239个氨基酸构成。在50 μL的反应体系中,建议使用1.5 μL的5× PCR Enhancer(如果需要)和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。Recombinant Human Netrin receptor DCC Protein,hFc Tag
检测重组EGFP(增强型绿色荧光蛋白)的活性和稳定性通常涉及一系列生物化学和分子生物学实验方法。以下是一些常用的检测方法:1.**SDS-PAGE电泳**:-通过SDS-PAGE电泳分析EGFP的纯度和分子量。-观察是否有蛋白质降解或聚合的迹象。2.**WesternBlot**:-使用特异性的GFP抗体进行Westernblot,以检测EGFP蛋白的存在和大小。-可以评估EGFP的表达水平和纯度。3.**荧光光谱分析**:-使用荧光光谱仪测量EGFP的激发和发射光谱。-评估荧光强度和比较大激发/发射波长,以确定其荧光特性。4.**流式细胞仪分析**:-如果EGFP融合蛋白表达在细胞中,可以使用流式细胞仪分析细胞群体的荧光强度。-这有助于评估EGFP的表达水平和细胞内分布。5.**荧光显微镜观察**:-在荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位和表达模式。-通过时间序列成像,可以评估EGFP在活细胞中的动态变化和稳定性。6.**热稳定性分析**:-通过逐渐升高温度并测量荧光强度的变化,可以评估EGFP的热稳定性。-热稳定性差的EGFP可能会在高温下迅速失去活性。7.**光稳定性测试(光漂白实验)**:-通过持续光照并监测荧光强度的下降(光漂白),可以评估EGFP的光稳定性。SP6 RNA聚合酶由于Cas9 NLS系统不涉及DNA的整合,因此降低了外源DNA整合至细胞基因组的风险 。
为确保大肠杆菌表达的重组抑肽酶的纯度和活性,需要考虑以下几个关键步骤:1.**高质量的细胞培养**:在GMP法规下生产,确保无动物源成分,从而避免动物源性的病毒污染。2.**蛋白纯化技术**:通过多次柱纯化过程来获得高纯度的重组抑肽酶,通常纯度达到≥95%(HPLC)。3.**活性测定**:使用标准化的生物活性测定方法来确保每毫克蛋白质的活性单位(EPU),通常≥3.0EPU/mgpro。4.**质量控制**:通过高效液相色谱(HPLC)等技术进行质量控制,确保蛋白含量和纯度符合标准。5.**稳定性和储存条件**:冻干粉在2~8℃条件下保存,有效期为2年,确保了长期稳定性。6.**使用建议**:提供明确的使用方法,包括推荐的结合pH值和溶解介质,例如使用0.9%NaCl溶解,并建议在pH<3.0条件下不结合,以保证活性。7.**法规符合性**:生产设备和环境符合相关法规要求,遵循NSFISO9001:2015质量体系,并符合GMP指导原则,确保产品质量和安全性。通过这些步骤,可以确保重组抑肽酶的纯度和活性,从而在科研和生物技术应用中发挥其作用。
EndoS糖苷内切酶在抗体药物偶联物(ADCs)的制备中发挥着至关重要的作用。EndoS是一种特异性的内切糖苷酶,它能够从IgG重链的N-糖基中切割N-连接的糖链。这种特异性使得EndoS在改造抗体的糖链结构时非常有用,尤其是在开发定点ADCs时。在ADCs的制备过程中,EndoS的作用主要体现在以下几个方面:1.**糖链切割**:EndoS能够特异性地水解抗体Fc片段上的N-糖链,为后续的糖链改造和药物偶联提供条件。2.**糖链改造**:EndoS可以用于去除抗体上的原有糖链,然后通过酶的催化作用,将特定的糖链结构重新连接到抗体上,实现糖链的定点修饰。3.**定点偶联**:通过EndoS的催化作用,可以将小分子细胞毒药物通过特定的糖链结构“一步”定点连接到抗体的糖基化位点,简化了ADCs的制备流程。4.**提高ADCs的均一性和稳定性**:EndoS介导的定点偶联技术有助于获得结构均一性更好、稳定性更高的ADCs,这对于提高药物疗效和减少副作用至关重要。5.**增强疗效**:利用EndoS进行的定点偶联可以提高ADCs的体内瘤抑制活性,即使在低载药量的情况下也能保持高效的抗瘤效果。
Benzonase核酸酶是一种来自粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的非特异性核酸内切酶,它能够高效降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线性和环状核酸,将其消化成2至5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。这种酶在生物技术领域有着广泛的应用,包括:1.**降低粘度**:在蛋白样品制备过程中,Benzonase核酸酶可以降低由于核酸引起的高粘度,从而便于样品处理和提高蛋白产量。2.**去除核酸污染**:在蛋白提取、疫苗生产、生物制药等领域,Benzonase核酸酶用于去除样品中的核酸污染,确保产品质量。3.**提高蛋白质分离效果**:在双向SDS-PAGE蛋白样品制备中,Benzonase核酸酶可以去除带负电荷的核酸,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率。4.**促进蛋白质复性**:在高质量包涵体制备中,Benzonase核酸酶有助于降解核酸,从而促进不可溶性蛋白的复性。5.**稳定性和兼容性**:Benzonase核酸酶在多种条件下稳定,包括高浓度的尿素,且与蛋白酶抑制剂兼容,但需注意EDTA对其活性的抑制作用。此外,Benzonase核酸酶的活性单位定义为在30分钟内使△A260值降低1.0的酶量,相当于完全消化37μgDNA。Cas9 NLS可用于体外实验中筛选能够高效引导Cas9蛋白进行DNA剪切的gRNA序列 。Recombinant Mouse RANKL/sRANK Ligand/TNFSF11Protein
Pfu DNA Polymerase的热稳定性和保真性使其在优化PCR条件时更为灵活,比如在GC含量较高的模板中。Recombinant Human Netrin receptor DCC Protein,hFc Tag
NLS-Cas9Nuclease是一种重组的化脓性链球菌Cas9蛋白,它在N端和C端都添加了核定位信号(NLS),这使得它能够更有效地进入细胞核并进行基因组编辑。这种蛋白与CRISPR/Cas9系统的引导RNA(gRNA)形成稳定的核糖核的蛋白(RNP)复合物,可以在进入细胞后立即定位到细胞核,从而诱导特定的DNA双链断裂,实现基因编辑。与传统的mRNA或质粒系统相比,使用NLS-Cas9Nuclease不需要转录和翻译过程,因此可以避免将外源DNA插入基因组的风险,这对于基因编辑尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特点包括:1.无DNA:系统不添加外部DNA,降低了插入外源DNA的风险。2.高切割效率:双NLS确保Cas9蛋白高效进入细胞核。3.低脱靶效应:Cas9核酸酶的瞬时表达提高了切割的特异性。4.节省时间:无需转录和翻译过程。这种核酸酶可以用于体外DNA切割筛选高效和特异性靶向gRNA,以及通过电穿孔或注射与特定gRNA结合时的体内基因编辑。产品的保存条件通常是在-25~-15℃,有效期为一年。使用时,可以根据推荐的反应体系进行体外DNA裂解实验,并通过琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。具体产品的详细信息和应用指南,可以参考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的资料。Recombinant Human Netrin receptor DCC Protein,hFc Tag
在分子生物学研究中,核酸染料是检测DNA和RNA的重要工具。然而,传统的溴化乙锭(EB)染料因其剧毒性和致病,逐渐被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作为一种新型的核酸染料,凭借其性能和安全性,成为科研工作者的理想选择。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙,这是一种细胞渗透性荧光染料,能够与核酸结合并发出荧光信号。其独特的荧光特性使其在检测双链DNA(dsDNA)时呈现绿色荧光(530 nm),而在与单链DNA(ssDNA)或RNA结合时则发出红色荧光(640 nm)。这种双重荧光特性不仅提高了检测的灵敏度,还为研究人员提供了更丰富的信息。在琼脂糖凝胶电泳...