无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。 有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。 研究者可根据样品的粘稠程度,以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便达到更好的得率和操作体验。 样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管,请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度,可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。上海超滤浓缩管销售公司。普陀区离心浓缩管联系人
截留 截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近 的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强 度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大恨多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下 会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择 合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择 为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先,再根据实际情况加以调整。普陀区离心浓缩管联系人超滤浓缩管的系列有很多种。
Minicon®浓缩器 Minicon® 浓缩器用于在电泳或免疫电泳分析前对尿液和脑脊液进行浓缩,以增强对不正常或病态的蛋白质(例如尿中的 Bence Jones 蛋白)的识别。B15型有 8 个浓缩单元,用于 5mL 样本的处理;CS15型有 10 个浓缩单元,适合 2.5mL 样品的处理。溶剂和盐分通过超滤被吸收剂吸收而样品被浓缩。 优点与应用 静态浓缩器,不需要其它辅助装置 浓缩倍数达到 100 倍,样品终体积小 同时浓缩多个临床样品 特别推荐用于尿液、脑脊液等的蛋白 富集分析
默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计 一经推出即成为生物样品操作的行业头牌产品。不论是蛋白、 核酸、***或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品, Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准 化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻 松。 Amicon® Ultra 超滤管的独特优点: 有效浓缩同时保证比较高的蛋白回收率 合理的死体积设计 •避免样品离干而降低回收率 •便于估计和控制样品浓缩倍数 •重复性好,便于样品数据相互比较超滤浓缩管哪家比较靠谱?
外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理 已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。 超滤方法纯化具体操作步骤举例 Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。 从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩) 注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 *超滤浓缩管具体报价多少呢。默克4ml超滤浓缩管订购
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微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据 NMWL分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL的超滤膜应该截留至少90%以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小 会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的NMWL膜和设备。普陀区离心浓缩管联系人