模式生物斑马鱼的应用斑马鱼在工业实验室中常被用作毒理学检验,是国际标准化组织推荐的五种实验鱼种之一。但随着对斑马鱼的进一步了解,其作为模式生物在生命科学以及医学研究中的作用正在崛起。以斑马鱼为模型研究目的基因在脊椎动物中的表达和功能利用斑马鱼胚胎透明的特点,构建绿色荧光蛋白(GFP)与内源性靶蛋白的融合蛋白,通过观察融合蛋白的荧光分布情况,借以确定目的基因或目的蛋白的功能和表达特点。同时,还可通过检测绿色荧光的分布,监测外源蛋白的表达在斑马鱼中的表达与分布情况。斑马鱼用来做什么试验?用斑马鱼做急性毒性实验
成功除了努力还需要借助科学的方法和先进的工具。斑马鱼模型的独特优势使其能够对现有的有体外实验和哺乳动物组成的传统药物研发模式,斑马鱼既可以作为体外实验和哺乳动物实验之间的桥梁,在早期淘汰大量成***不佳的候选化合物,减少哺乳动物实验阶段的时间和费用成本。同时,一些靠现有方法很难解决的药效和安全性评价模型可以通过斑马鱼来解决,打破实验技术方面的瓶颈和束缚;另外,利用斑马鱼模型,我们可以在一些特定靶向药物的开发上采用新的研发模式,从斑马鱼筛选开始,将活性与安全性较好候选化合物筛选出来后,同时开展体外机制研究和哺乳动物体内实验,通过这种模式,可以大幅缩短早期研发周期、节省研发成本、提高药物发现的成功率。斑马鱼急毒性实验方案为什么用斑马鱼做试验?
斑马鱼血管生成基因如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、an-iopoietins、ephrions及相应受体与哺乳动物功能相似,而且斑马鱼血管系统及其对调节血管新生类药物的***反应与哺乳动物类似。另外斑马鱼胚胎在血液循环系统严重缺陷的情况下仍能存活,且胚胎透明,利用血管转基因荧光斑马鱼可以在24小时以内就定量评价药物的血管形成***作用。
与传统的鸡胚尿囊膜、小鼠角膜实验相比,斑马鱼更加便捷、快速、高效,而且结果定量分析的准确度更高。
目前多个出于临床试验阶段的抗血管生成靶向候选***药如SU5416、SU6668、TNP470、SU4312和AG1478等均对斑马鱼的血管形成有***的***效果。用斑马鱼筛选发现具有血管形成***活性的中***体化合物也有很多,如靛玉红、呋喃二烯等。
斑马鱼与免疫学研究斑马鱼作为免疫学新模式生物的优点在于:(1)与传统的免疫学模式生物——小鼠相比,斑马鱼有体型小,子代数量多,培育要求低,易于养殖,饲养成本低,便于开展大规模研究。(2)斑马鱼个体发育过程是在全透明状态下完成,使得整个心血管系统的发育过程能十分完整的被观察。特别是免疫系统个体发育的相关资料,是无法从小鼠上所进行的实验中轻易获得的。(3)先期对斑马鱼的遗传学研究积累的丰富突变库也为研究免疫相关基因的功能提供了条件。(4)在目前已知生物中,鱼类是**早具备获得性免疫系统的纲。这就使得对斑马鱼免疫系统的研究成为人们了解非特异性免疫系统和获得性免疫系统进化与功能相互关系的重要工具。这个独特的免疫系统进化地位还赋予了斑马鱼作为免疫学研究模式生物的另一重要优势,即其成体可以在没有胸腺、淋巴细胞生成的情况下存活传代,这又是小鼠模型无法比拟的。传统的免疫学模式生物相比便于开展大规模研究。
当各种内源性和外源性DNA损害因子诱发细胞DNA链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中,而核DNA因为分子量太大只能留在原位。在中性条件下,DNA可进入凝胶发生搬迁,而在碱性电解质的作用下,DNA发生解螺旋,损害的DNA断链及片段被释放出来。因为这些DNA的分子量小且碱变性为单链,所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA向正极搬迁构成“彗星”状图像,而未受损害的DNA部分保持球形。DNA受损越严重,发生的断链和断片越多,长度也越小,在相同的电泳条件下搬迁的DNA量就愈多,搬迁的距离就愈长。通过测定DNA搬迁部分的光密度或搬迁长度就可以测定单个细胞DNA损害程度,然后确认受试物的作用剂量与DNA损害效应的联系。彗星试验检测低浓度基因毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。一起,这种技术只需要少数细胞。斑马鱼成效试验结果是什么?斑马鱼生物检测
试验室揭秘|斑马鱼试验室!用斑马鱼做急性毒性实验
斑马鱼敲除品系成功案例1、基因分析分析目的基因的保守结构域;2、靶点筛选设计4个gRNA靶点,PCR检测包含靶点的区域真实序列,显微注射验证靶点效率;3、大规模注射养殖F0Cas9pro+gRNA共注射,共养殖F0约80条用于后期Founder筛选;4、Founder筛选F0代斑马鱼与野生型外交,收集48hpf的F1胚胎抽取基因组,PCR鉴定,测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变,然后TAclone验证其可能产生的突变方式;5、F1代筛选F1代斑马鱼剪尾筛选,TAclone验证突变方式:用斑马鱼做急性毒性实验
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