报告基因选用GFP或RFP,**小启动子来自斑马鱼gata2基因;将上述载体与体外转录得到的Tol2转座酶的mRNA共同注射到斑马鱼的单细胞受精卵中,受精卵长大后成为founder;Founder外交(out-cross)得到F1代胚胎,从中挑选出对于报告基因具有组织特异性表达模式的胚胎,拍照记录后分类培养;F1长大后通过linker-mediatedPCR的方法鉴定对应于GFP(或RFP)表达图式的Tol2插入位点,并通过与已知基因组数据比较,对插入位点进行定位与分析;通过外交纯化得到转基因鱼,直至得到只含有单个插入品系的转基因鱼。斑马鱼行为学剖析体系。斑马鱼行为学仪器
斑马鱼基本特点原产地:热带淡水鱼,原产于喜马拉雅山南麓的印度、巴基斯坦、孟加拉和尼泊尔等南亚国家。成鱼体长3-100px,略呈纺锤形,头小而稍尖,吻较短,身躯玲珑而纤细,因其体侧具有像斑马一样纵向的暗蓝色与银色相间的条纹而得名。斑马鱼是体外受精发育,胚体透明。胚胎发育快,受精后3天左右孵化出膜,天左右开口进食,约3个月达到性成熟,寿命可达2年以上。斑马鱼可常年产卵,繁殖周期3-4天,一对成年斑马鱼每次可产卵200-300枚,受精率通常在70%以上。养殖温度一般在23-31℃,15℃左右仍可存活,比较好养殖温度在25-28摄氏度之间,pH值在6.8~7.8,硬度在2~6之间。斑马鱼行为学仪器斑马鱼药物毒理学评价技术。
斑马鱼体长只有3厘米,1升水里可以包容上百条、养殖起来很简单。此外,斑马鱼很简单鉴别男女并且它的胚胎是透明的,人们可以清楚地看到它的内脏、血管和神经的发育变化。正是因为这些特色,斑马鱼引起了美国俄勒冈大学闻名遗传学家乔治博士的留意,这位热带鱼爱好者在20世纪70时代初开始研讨斑马鱼的养殖办法,观察其胚胎发育进程。经过近十年的研讨,乔治博士的研讨组于1981年发表了一篇具有深刻影响的论文。在这篇论文中,他们介绍了斑马鱼的体外受精等许多新技术,接着又介绍了斑马鱼的卵裂特色、不同时期胚胎中细胞的发育进程等,并发现斑马鱼脑中的许多神经元的摆放简单而有规矩。
别的还有科学家发现,斑马鱼的脑部神经元较为简单和可猜测。这些研究成果证明了斑马鱼合适用作形式动物。现在咱们已经知道,斑马鱼的基因与人类基因的相似度到达87%,这意味着在其身上做药物试验所得到的结果在大都情况下也适用于人体。此外,雌性斑马鱼可产卵200枚,胚胎在24小时内就可发育成形,这使得生物学家能够在同一代鱼身上进行不同的试验,进而研究病理演化过程并找到病因。正是通过在斑马鱼身上进行的试验,生物学家发现,包含人类在内的一些脊椎动物之所以产下奇异的双头幼仔是因为两种基因活动紊乱形成的。斑马鱼毒性检测实验意义及作用!
斑马鱼敲除品系成功案例1、基因分析分析目的基因的保守结构域;2、靶点筛选设计4个gRNA靶点,PCR检测包含靶点的区域真实序列,显微注射验证靶点效率;3、大规模注射养殖F0Cas9pro+gRNA共注射,共养殖F0约80条用于后期Founder筛选;4、Founder筛选F0代斑马鱼与野生型外交,收集48hpf的F1胚胎抽取基因组,PCR鉴定,测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变,然后TAclone验证其可能产生的突变方式;5、F1代筛选F1代斑马鱼剪尾筛选,TAclone验证突变方式:你不知道的水中小白鼠:斑马鱼,正在默默为科学试验奉献!斑马鱼房装修公司
物质对淡水鱼 (斑马鱼) 急性毒性测定方法。斑马鱼行为学仪器
当各种内源性和外源性DNA损害因子诱发细胞DNA链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中,而核DNA因为分子量太大只能留在原位。在中性条件下,DNA可进入凝胶发生搬迁,而在碱性电解质的作用下,DNA发生解螺旋,损害的DNA断链及片段被释放出来。因为这些DNA的分子量小且碱变性为单链,所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA向正极搬迁构成“彗星”状图像,而未受损害的DNA部分保持球形。DNA受损越严重,发生的断链和断片越多,长度也越小,在相同的电泳条件下搬迁的DNA量就愈多,搬迁的距离就愈长。通过测定DNA搬迁部分的光密度或搬迁长度就可以测定单个细胞DNA损害程度,然后确认受试物的作用剂量与DNA损害效应的联系。彗星试验检测低浓度基因毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。一起,这种技术只需要少数细胞。斑马鱼行为学仪器