摇床孵育5分钟,以中和过量的多聚甲醛;(c)弃甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室温清洗5分钟;(d)每孔加入300ulTritonX-100细胞通透液,室温通透10分钟,弃细胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室温清洗5分钟;染色反应液组分500ul1ml2ml5mlIX反应缓冲液430ul860ulmlml催化剂溶液20ul40ul80ul200ulTAMRA红色荧光溶液ulul5ulul缓冲添加剂50ul100ul200ul500ul(d)每孔加入100ul配置好的检测混合液,以覆盖细胞为宜,避光、室温孵育30分钟。(e)弃染色反应液,加入300ulTritonX-100细胞渗透液清洗2-3次,每次10分钟;(f)弃细胞渗透液,用PBS洗两次,每次5分钟。DNA染色(a)将Hoechst33342用PBS溶液1:1000进行稀释得到终浓度为5ug/ml的lxHoechst染色液;(b)每孔加入300ul1xHoechst染色液,室温避光孵育20-30分钟后,弃染色液;(c)每孔加入300ulPBS洗细胞两次,去掉洗液。EdU细胞增殖检测试剂盒去哪买?天津品牌EdU细胞增殖检测试剂盒说明书
试剂盒以外自备试剂和仪器:●PBS●纯水●1%乙酸●移液器及吸头●有515nm波长的酶标仪使用方法:使用注意事项:●接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发,为了减少误差,建议培养板的四边每孔只加培养基,而不作为指标检测孔。●培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。●用水或乙酸洗细胞时充满孔后保持一会倒掉即可,也可以用排或洗板机。●OD值在1-2之间较好。以96孔板为例:1.取出培养好待测的96孔板。2.在培养基表面小心加入50μl固定液(悬浮细胞加100μl固定液),静置5分钟后放入4℃冰箱30分钟-1小时。(贴壁细胞可弃培养基后加入用水3倍稀释的固定液;悬浮细胞必须直接加入固定液,轻加在培养液面,静置5分钟后再将平板移至4℃放置1小时,可使悬浮细胞固定在培养孔底部)。 浙江咨询EdU细胞增殖检测试剂盒优势EdU细胞增殖检测试剂盒的结构如何组成?
直接测定DNA合成是细胞增殖检测的准确方法之一,的EdU细胞增殖检测试剂盒采用另外一种胸腺嘧啶核苷酸类似物-EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷),在细胞增殖时EdU能够插入正在复制的DNA分子中,利用EdU与染料之间的点击化学(ClickChemistry)反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比(图1),更简单,更快速,更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。EdU分析方法反应条件比较温和,我们提供的一系列AndyFluor™染料标记可以用于多色通道选择。
EdU细胞增殖检测和BrdU细胞增殖检测的对比。小分子化合物AndyFluor™azide与EdU之间的点击化学(ClickChemistry)反应不需要DNA变性,就可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,该反应不受双链DNA中碱基对的影响,因此客户了BrdU掺入法的弊端。图2.使用EdU细胞增殖检测试剂盒对细胞和组织的染色效果。使用10μMEdU处理A549细胞2小时,然后分别使用AndyFluor™488azide(绿色,上图)、AndyFluor™594azide(红色,中间图)检测细胞增殖活性,使用DAPI进行复染(蓝色)。腹腔注射EdU到小鼠体内(每公斤小鼠注射5mgEdU),分别于0、12、24小时之后取小鼠肠组织,制成切片用AndyFluor™488azide(绿色,下图)检测细胞的增殖情况,使用DAPI进行复染(蓝色)。上海EdU细胞增殖检测试剂盒的发展趋势。
测定ATP水平检测细胞增殖活细胞需要不断以ATP的形式输入自由能,因此通过检测ATP的增加水平可检测细胞增殖。ATPBioluminescenceAssayKitHSII及ATPBioluminescenceAssayKitCLSII是通过经典的荧光素酶发光对ATP检测定量的试剂盒。前者主要应用于高灵敏度检测极低浓度ATP的实验,后者主要应用于当有持续信号产生而需要高重复性结果的实验。DNA的合成的检测:DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件,故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。BrdU及EdU,都是胸腺嘧啶的非放射性类似物,能掺入增殖细胞的DNA中,可通过对BrdU及EdU的检测,从而对DNA的合成量进行测定。EdU细胞增殖检测试剂盒怎样使用?上海东寰告诉您。江苏如何使用EdU细胞增殖检测试剂盒哪家好
EdU细胞增殖检测试剂盒的运用领域有哪些?天津品牌EdU细胞增殖检测试剂盒说明书
EdU-488细胞增殖检测试剂盒(Meilun EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488),是一种利用核苷渗入法对细胞增殖情况进行快速、简单、高灵敏检测的试剂盒。其原理为:试剂盒中的EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine)是一种胸苷(T)类似物,EdU可以在在细胞周期的S期中替代胸苷掺入到新合成的DNA中;另一方面,EdU上的乙炔基能与叠氮化物(如荧光探针Alexa Fluor 488 Azide)通过Cu+的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应(Click reaction)(图1)。通过点击反应,新合成的DNA会被绿色荧光标记,然后通过检测荧光信号实现细胞增殖的检测。天津品牌EdU细胞增殖检测试剂盒说明书
建议染色完成后立即进行荧光显微镜拍照观察;如果条件限制,请于4°C条件下避光湿润保存3天之内完成拍照...
【详情】EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似,而EdU染料大小只有BrdU抗体的1/500,在细胞内很容易扩散...
【详情】现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生——EdU检测。EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)也...
【详情】建议染色完成后立即进行荧光显微镜拍照观察;如果条件限制,请于4°C条件下避光湿润保存3天之内完成拍照...
【详情】为了与其他荧光共同使用,东寰生物提供多种染料供选择,覆盖常用检测通道,方便您轻松选择适合的染料,比较...
【详情】细胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛细胞固定液,室温培养30分钟,弃固定液;(b)毎...
【详情】该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育...
【详情】EdU上的乙炔基能与生物素标记的叠氮化物(Biotinlabeledazide)通过一价铜离子的催化...
【详情】EdU细胞增殖方法简单,方便,无需DNA变性,能够与各种抗体或荧光蛋白同时标记,以检测细胞其他性状特...
【详情】EdU细胞增殖检测试剂盒稳定:适用于对细胞增殖状况的连续观察●经济:无需裂解细胞,细胞可继续培养或用...
【详情】传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤...
【详情】保存条件:-20℃保存,一年有效。BiotinAzide、DAB显色液A和DAB显色液B须避光保存。...
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