外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,可通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体,内涵体与细胞膜融合后释放其中的小囊泡。外泌体的直径在40-110nm之间,其中包含RNA、蛋白质、microRNA、DN段等多种物质,存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中。外泌体从发现至今已有30多年的历史,虽然较初被认为可能是细胞的“垃圾”,所以才被排出来,但是近年来研究表明外泌体具有功能活性并可进行细胞间信息传递。如今,研究已经发现外泌体在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、一些病症细胞发生的发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。外泌体提取:免疫分离技术。杭州正规外泌体提取试剂生产厂家
Exosome,中文名外泌体,是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现,但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年,人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。较近的研究发现外泌体在很多生理病理上起着重要的作用,如免疫中抗原呈递、一些病症的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构,能很好的保护其包被的物质,且能靶向特定细胞或组织,因此是一种很好靶向给药系统(targeteddeliverysystem)。厦门正规外泌体提取试剂供应商超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受?欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定,纯度也受到质疑。
聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集细菌,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是效率低,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。
外泌体相关miRNA与肺病的诊断:miRNAs是一类含有20~25个核苷酸的非编码小RNA,能够通过下调或压制靶mRNAs来调节转录水平上的基因表达,目前非编码RNA被普遍发现存在于NSCLC患者外泌体中,参与一些病症的形成和演化过程。单个miRNA可能通过压制性复合物与多个mRNA结合,从而阻滞整个生物通路。因此,外泌体的miRNA具有成为NSCLC标志物的优势。Chen等在152例肺病患者的研究中初次报道了循环游离miRNA的表达,与75例健康者相比,发现了两种高表达的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等对27例肺病患者和9例健康人的血浆外泌体中12个miRNA的表达进行了评估,结果显示,12个一些病症相关的miRNA*在肺病患者中过度表达。Cazzoli等收集了30个血浆样本,发现4种外泌体miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明显升高,用于筛查患者与健康人ROC曲线下面积(AUC)为0.908。外泌体提取:尺寸排阻色谱。尺寸排阻色谱是基于大小而非分子量实现分离大分子。
研究初次发现疟原虫传染小鼠血浆外泌体(exosomes)能够压制一些病症血管生成,并初步阐明其分子机制。研究加深了对疟原虫传染宿主所分泌的外泌体与一些病症血管生成之间的相互作用的认识,为开发疟原虫传染来源的外泌体作为一种新型抗一些病症制剂奠定了基础。研究人员选用肺病小鼠模型作为研究对象,从传染疟原虫的小鼠血浆中获得外泌体,并将这些外泌体注射到小鼠的一些病症内部,并与没有疟原虫传染的小鼠血浆外泌体进行对照。研究发现,疟原虫传染小鼠的血浆外泌体明显压制一些病症血管的生成。进一步的研究发现,疟原虫传染的小鼠血浆外泌体通过至少四种特殊的微小RNA(miR16-5p/17-5p/322-5p/497-5p)压制血管内皮细胞VEGF受体(VEGFR2)的表达从而阻断血管生成的信号通路。这些发现加深了人们对疟原虫抗病机理的理解,并为疟原虫疗法治病一些疾病的临床研究提供进一步的理论依据。外泌体的提取方法:超滤离心。昆明外泌体提取试剂推荐厂家
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所有的细胞都能分泌外泌体,但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量上还是在内含物中都具有很大的差异性,这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。外泌体普遍参与细胞间物质运输与信息传递,调控细胞生理活动。同时,外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进一些病症发生和转移等作用;此外,外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外泌体相关数据库有哪些?lexoRBase数据库收集和描述人类血液外泌体中所有长的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia数据库汇总了不同囊泡研究中发现的蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。lExoCarta数据库主要收录了包括人、大鼠、小鼠、绵羊等几个物种的286个研究结果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。杭州正规外泌体提取试剂生产厂家
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液及其他体液(脑脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。注意事项:1.对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。2.当血清、血浆、唾液等样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。3.针对外泌体标志蛋白(CD63,CD9,CD...