参考原理：血液中单个蛋白质分子的检测有助于识别许多新的诊断性蛋白质标记物。我们报告了一种同时检测数百至数千个单独蛋白质分子的方法，该方法能够检测到非常低浓度的蛋白质。蛋白质被捕获在显微珠上，并用酶标记，每个显微珠上有一个或零个酶标记的蛋白质。通过将这些显微珠分离成50飞米的阵列反应室，单个蛋白质可以通过荧光想象检测到。通过单化这些阵列中的分子，~10-20种酶可以在100μL（~10−19M）中检测到。单个基于酶标记的分子酶联免疫吸附试验（数字ELISA)能够检测血清中临床相关的蛋白质，其浓度（<10−15M）远低于传统ELISA3-5。数字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除术的患者血清中检测到前列腺特异性抗原，比较低至14fmol/mL（0.4fmol）。
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阵列芯片原理：从15µLof基质中的500,000个珠子开始。结果表明，阵列图像的定量分析大约一半的孔在珠子沉降几分钟后被占据。对于SimoaHD-1分析仪，沉降时间减少到90秒，分布在三个仪器处理周期之间。随着珠子重新沉降到阵列中，仪器对其他操作（密封和成像）进行索引，这些操作已经加载到阵列上。通常，会检测25,000-50,000个珠子。由于Simoa中的测量单位（AEB）是一个比率，一定珠装载量的差异不影响数据质量或在大多的范围内保持精度，前提是存在足够的珠子数量以保持在泊松噪声水平之上。22数据质量会受到影响，当泊松噪声主导测量误差时。这发生在与背景相关的正井数量降至约50个珠子以下时，此时泊松噪声明显影响测量的变异系数（CV）。
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它是一种DVD大小的圆盘，由24个阵列组成，每个阵列包含240微米大小的微孔，这些微孔呈径向排列，以便使用蓝光制造工艺和仪器内的液体处理并行处理。图2B显示了集成阵列及其相关流体通道的设计。每个阵列由216,000个40飞升大小的微孔组成，以六边形紧密排列模式排列在平面表面的3×4毫米区域内。每个微孔的标称尺寸为4.25µm直径、3.25µm深度和8µ米中心间距。流体通道深0.5毫米，通道和流体入口端口的总体积为74µLto，可容纳珠子和密封油溶液。通道中包含一个收缩部分以减少液体回流。微珠的分级是西莫亚技术的关键要求，微孔的几何形状足以容纳单个微珠（2.7µmdiameter；以下简称珠子）。西莫亚圆盘由环烯烃共聚物（COP）制造，因其具有高通量注塑成型的适应性，且成本低廉。具有良好的化学、生物和光学性能 芯弃疾JX-8B数字ELISA, 极速检测，快15min能完成 的ELISA检测！
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数字ELISA测量蛋白质浓度远低于传统ELISA的能力源于两种效应：1）SiMoA对酶标记的高度敏感性；以及2）通过数字化蛋白质检测可以实现的低背景信号。任何免疫测定的灵敏度由其灵敏度决定。检测技术到标签，抗体亲和力，试验背景，以及背景测量值的变异（%CV）27.SiMoA对酶非常敏感标签（图2）为在数字ELISA中检测亚飞摩尔浓度的标记蛋白提供了基础。也就是说，对于给定亲和力的抗体，其灵敏度为免疫测定将由测定背景决定，SiMoA的高标记灵敏度有助于降低这种背景。对照实验表明，数字ELISA的背景来自于检测抗体和酶的非特异性结合（NSB）与捕获珠表面结合（补充表2）。AsSiMoA相比传统检测方法具有更高的标记灵敏度，明显减少了检测抗体（~1nM)和酶标记物（1–50pM)的需要，以检测结合事件，与传统方法相比（标记试剂浓度~10nM)。降低的标记物浓度减少了NSB到捕获表面，从而导致背景信号明显降低。 芯弃疾JX-8B简易版单分子ELISA检测产品，极速检测，检测用时只需要 15-30min！高科技数字ELISA检测速度快
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珠子以两种不同的方式读出。首先，在与100μMresorufin-阝-D孵育1小时后，用荧光板读出器以100μL方式读出珠子结合-半乳糖苷（RGP），一种荧光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板阅读器上，检测限为15fMofS阝G（图2）。其次，将珠子加载然后将RGP溶液密封到阵列的孔中，单个酶的信号被允许在反应室中积累，并每30秒获取一次荧光图像。实验结束时获取阵列的白光图像以识别含有珠子的孔（含有珠子的孔散射光与空井不同）。荧光图像用于确定哪些微球具有相关的结合酶（从时间变化的荧光图像中强度增加）。图2显示了微球中含酶的比例与总体S阝G浓度的关系的对数-对数图。检测到的比较低酶偶联物浓度为350飞摩尔（zM），并通过外推信号等于的酶浓度计算得出的检测限（LOD）。 医疗检测用数字ELISA检测通量
