自动化细胞计数
结果
为了突出fluidlabR-300在自动细胞计数方面的多功能性,我们在三种不同形态和大小的细胞类型上测试了fluidlabR-300的性能(图1)。HeLa细胞是***个在生物学和临床研究中仍然普遍使用的不朽人类细胞系。根据不同的培养条件,HeLa细胞的直径通常为20-40μm范围内。相比之下,外周血单核细胞(PBMCs)是小的人体细胞之一,直径约为7-10μm。PBMCs是一种常见的原代细胞源,用于临床诊断和免疫学的研究。使用传统的细胞计数方法来精确量化原代细胞样本的细胞浓度是具有挑战性的,因为它们通常含有不同的细胞类型及细胞碎片。我们使用平均大小约为5μm的酵母细胞(酿酒酵母)来评估在非常小的细胞上进行细胞计数的性能。酵母是分子和细胞生物学中研究**深入的真核生物模式生物之一,但它对啤酒酿造的发酵过程和葡萄酒工业也至关重要 德国进口anvajo fluidlab R-300便携式光谱仪。山东特制fluidlabR-300便携式细胞计数仪品牌排行
论述
来自异源系统(如大肠杆菌)的蛋白质表达是许多研究领域的重要工具。在这里,我们阐述了fluidlabR-300对于P450酶表达质量评估是如何完成的。使用该工具和标准化学物质可以评估到所产生的酶的纯度和血红素掺入程度只有23%。我们可以得出结论,三组数据极为接近。首先,所表达的P450氧化还原酶*为Bradford试验测定的肽总库的一小部分,该部分可以使用SDS-PAGE或甚至质谱分析来测定。其次,细胞裂解物未经离心产生高杂质,光谱中可以看见在实际含血红素部分附近有一个近紫外峰。细菌细胞对FeCl3和δ-氨基乙酰丙酸的摄取可能需要监测或至少改变,以通过将酶转移到所需的小部分来改善血红素的掺入。监测也可以通过光谱法进行,使用例如铁锌作为比色测定的螯合剂。总体而言,本次质量评估的所有步骤都是通过手持设备完成的,这使得例如在生产环境中的质量控制直接可行,而无需将任何方法转移到另一个分析系统。 上海推荐fluidlabR-300便携式细胞计数仪参考价细胞技术/光谱仪的能力如何?
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介绍
在本研究中,我们根据CLSI EPO5-A32的推荐规范评估了fluidlab R-300细胞计数器的性能。为此,我们在计数三种不同形态和大小的细胞类型(HeLa、PBMCs和酵母)时,评估了准确性、精密度、线性和重复性。我们的数据表明,fluidlab R-300细胞计数器是准确的,精确的,并且在大范围的细胞类型和浓度下确保结果的线性。
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校准曲线、细胞裂解和蛋白含量测定使用牛血清白蛋白(SigmaMerck,德国)在现成的(ready-to-use配置好的)Bradford溶液中制备用于测定蛋白表达总量的校准曲线,该溶液也购自Sigma(德国)。在Triton-X缓冲液中进行细胞裂解以产生可溶性膜组分并随后进行超声处理。然后通过分光光度法测量上清液的蛋白质产量和正确的血红素掺入。
蛋白浓度测定通过内置浓度曲线app,细胞裂解物的蛋白质浓度分为三组分,结果如表1所示,显示的变异系数为灭绝1%,浓度2%。
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光谱仪的能力如何?
我们的光谱仪在 0 - 2.5 的值范围内呈线性,光度精度为 0.01 或 1 %。可以在 375 nm 和 700 nm 之间捕获光谱,光谱分辨率小于 2 nm。更多信息可以在光谱仪的性能报告中找到。
细胞计数仪的功能如何?
我们的细胞计数仪与手动方法(Neubauer 室)和已建立的自动细胞计数仪均显示出高度相关性(准确度为 99%,确定系数 R²=0.9956)。
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结果
生长曲线
生长曲线如图1所示,并显示出坚实的线性生长行为,直到OD约为0.8,此时系统收敛到饱和状态。图1:大肠杆菌生长曲线(在0.3消光值时接种IPTG)
校准
曲线使用BSA和制造商的曲线制备说明,通过装置上应用程序“校准曲线”计算标准曲线。得到0.98的R2(图2)
图2:FluidlabR-300显示校准曲线(双倍)
生长曲线
接种过夜预培养物后,在37°C、持续振荡90小时的条件下监测大肠杆菌生长曲线。使用fluidlab的适配器3和600nm的固定波长。从预实验中表明,线性相位从0.3开始,因此此时可以用IPTG进行诱导。 山东特制fluidlabR-300便携式细胞计数仪品牌排行
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