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    简单可靠的活细胞冷冻保存方法是非常重要的。传统的冷冻方法一般含有血清及10%二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）。但血清存在安全隐患，且DMSO具有细胞毒性，在干细胞冻存中应尽量减少使用浓度或不使用。Lee等推荐应用磁冷冻法储存hDPSCs，通过实验对比不同的冻存液和冻存条件的效果，发现在无血清培养基中加入**低浓度的DMSO同时处于磁场下进行冷冻时，解冻细胞的贴壁能力、增殖能力和干细胞标志物的表达均得到较好的保存，且具有与新鲜未冻存hDPSCs相同的分化潜能。Mochizuki等使用无DMSO低温保存的无血清培养hDPSCs进行体内外实验，结果表明解冻后的细胞表现出与正常细胞相似的干细胞特性和增殖行为。目前，此类研究结果仍然较少，不过仍然提示无血清培养基可应用于hDPSCs的**温保存，具有重要的临床应用价值。来源：付恒怡,汪成林.人牙髓干细胞无血清培养方法的研究进展[J].国际口腔医学杂志,2022,49。离体牙存储的优势在哪里？天津值得推荐的离体牙存储认真负责

    提示：原代培养使用无血清培养基会对细胞生长产生或多或少的不利影响。AbdelMoniem等在干细胞培养过程中只有在传代培养细胞胰蛋白酶失活时使用了**低浓度的FBS，他们建议在之后的研究中尝试采用机械分离或用危害小的蛋白酶（如重组胰蛋白酶）取代胰蛋白酶，以确保细胞不会受到任何血清来源的影响。**近有研究便采用了后者的方法，运用消化酶AccutaseTM建立了一种从分离到培养和分化诱导全过程的无血清培养方法，发现培养的hDPSCs可以和在常规培养条件下一样增殖，提示全程无血清条件培养方法具有一定的可行性。有一些有关基础培养基中添加因子组成和配比的研究，如Hirata等尝试对比4种添加不同因子的无血清培养基，结果发现含1%胰岛素转铁蛋白硒（insulintransferrinselenium，ITS）-Ⅹ和100mg·mL-1胚胎营养因子（embryotrophicfactor，ETF）**适合hDPSCs的培养，具有较高的存活率和增殖率，且干细胞标志物中表达**强。Machado等在有血清和无血清的条件下，在培养基中分别添加不同浓度的葡萄糖和谷氨酰胺，发现在去谷氨酰胺的无血清低糖培养基中培养的细胞具有较好的形态和活力。有研究表明，在培养hDPSCs时应用较多的有几种双无培养基。河北本地离体牙存储诚信推荐离体牙存储用什么设备？

    另一项研究显示，CD105在无血清培养hDPSCs中的表达非常低且培养过程中没有明显改变。CD34是早期分离的MSC的重要标记物，与高集落形成效率和延长增殖能力相关，但其表达随着传代而逐渐减弱。有报道称，无血清培养下的hDPSCs造血标志物CD45及CD34表达呈阴性，但长期扩增后CD34表达明显上调，与先前报告一致。另外，从传代早期到后期，公认的MSC标记物如CD90和CD73在基于血清和无血清培养条件下都能稳定地表达。然而，有学者发现，其他MSC标记如Stro-1和胚胎标记阶段特异性Embyronic抗原（stage-specificEmbyronicantigen，SSEA）-1和SSEA-4，在无血清培养多代后显示出明显的下调，是否会因此而影响hDPSCs的干性，需要进一步实验予以补充完善。、成软骨及成脂标志物的表达早期研究表明，成骨和成软骨受到Runx2转录调控通路调控，软骨形成受到SOX-9的强烈调控，而成脂受到其主要转录因子过氧化物酶体增殖物***受体（peroxisomeproliferators-activatedreceptors，PPAR）-γ调控。研究显示，无血清条件下扩增hDPSCs会导致其成骨标志物Runx2表达增加，成软骨标志物SOX-9和成脂标志物PPAR-γ完全消失，而对比含血清条件下扩增只有成骨标志物的变化，成脂和成软骨的变化不明显。

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