胞外囊泡和外泌体

外泌体的提取方法：超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。超速离心法得到的外泌的体量比较多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡而不是外泌体。过滤离心法，这种操作简单、省时，不会影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期的准备工作繁杂，比较耗时，量少。外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质。胞外囊泡和外泌体

液体活检是一种非侵入性的血液检测突破性技术，能早期快速地检测中流及其病灶或者转移过程中释放到血液中的循环中流细胞（circulatingtumorcell，CTC）、循环中流DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA）和中流外泌体等中流组分。中流外泌体作为液体活检的一个重要组成，基于其内容物成分多样和稳定等优势，正成为中流标志物相关研究的热点。中流来源纳米大小的外泌体具有易通过血脑屏障、天然的归巢特性、双分子层脂质结构的稳定性和高效的生物相容性等特征。因此，中流外泌体正成为中流靶向zhiliao理想的载体，尤其是工程化外泌体更表现出很好的中流靶向干预和增强药物zhiliao的效果。胞外囊泡和外泌体在过去几年中，有几个实验室报道了各种细胞类型的外泌体分泌，并讨论了其潜在的生物学功能。

细胞分泌外泌体的过程一般分为三个阶段:(1)质膜内陷,形成早期内吞小泡;(2)内吞小泡向内萌发成熟,形成多囊泡体;(3)多囊泡体与质膜融合,并释放出囊泡内容物,形成外泌体。外泌体具有独特的理化性质,其密度为1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的双层脂膜所包裹,具有典型杯状形态,呈现为扁平球形。外泌体表面富含多糖链,其质膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、胆固醇、神经酰胺和鞘磷脂构成,另有与细胞来源相关的部分特殊脂类。外泌体可携带蛋白质、核酸和脂质等生物活性大分子,其中主要为蛋白质,且大部分蛋白为所有来源外泌体所共有,只有小部分与其来源有关,为其分泌细胞的特有蛋白,能够反映分泌细胞的类型和生理病理状态。除此之外,外泌体可携带大量mRNA和miRNA等核酸,并将其运输到靶细胞,发挥相应的生物学功能。

外泌体的生物发生途径主要包括三个关键的检查点：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和细胞膜的融合，这三个检查点都包含在内体相关的囊泡运输过程中。RABGTPase定位到特定膜结构的表面，通过招募效应因子来调节相应膜结构的囊泡运输，例如，在内体溶酶体运输网络中，RAB5调节早期内体的形成及相互融合；内体膜上RAB5到RAB7的转换调节早期向晚期内体的转变；RAB7调节晚期内体/MVEs与溶酶体的融合来降解ILVs；RAB27调节MVEs与细胞膜的对接和融合来释放ILVs形成外泌体。内吞的膜蛋白，特别是受体酪氨酸激酶家族的表皮生长因子受体，定位到内体和MVEs，通过MVEs和溶酶体融合来进入溶酶体降解，此过程受多种RABGTPases和ESCRT复合体的调控。各种细胞粘着分子在外泌体膜表面表达，由其决定外泌体被运输往哪一种细胞。

外泌体（Exosome），是细胞外囊泡（EV）的一种主要类型，是直径为30至150nm的纳米大小的膜结构，大多数细胞都会分泌外泌体。外泌体存在于各种生物体液中，通过其携带的蛋白质、核酸、脂质和代谢物等来发挥细胞间通讯功能，参与免疫应答、代谢和心血管疾病、神经退行性疾病以及病症进展等多种生理和病理过程。在内体转变为成熟多囊泡内体（MVE）的过程中，内体膜向腔内出芽形成腔内囊泡（ILV），MVE与细胞膜融合释放ILV到细胞外，即形成外泌体。外泌体被工程化改造后，具有靶向特定细胞类型或组织的功能。外泌体捕获技术

有报导指出，外泌体内miRNA参与促进血管新生、抗症性和促进胶原蛋白沉淀等一系列过程。胞外囊泡和外泌体

多项研究表明中流细胞来源的外泌体能够抑制免疫相关的信号通路、阻碍机体对中流的免疫响应。Chen等研究发现黑色素瘤细胞、乳腺ai和肺ai细胞会产生携带程序性死亡分子1的配体(programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)的外泌体，此类外泌体在血液中循环，通过表面PD-L1与T细胞结合，导致T细胞在到达中流细胞之前即受到抑制，达到远程干扰免疫细胞活性的效果。中流来源的外泌体能够抑制骨髓来源的抑制性细胞(该细胞是树突状细胞(dendriticcells，DCs)、巨噬细胞和(或)粒细胞的前体，具有抑制免疫细胞应答的能力)对中流的免疫监督。中流细胞来源的外泌体与巨噬细胞共孵育后，其内的miRNA-301a通过下调抑ai基因PTEN)，激huoPI3Kγ(phosphoinositide3-kinaseγ)信号分子，使巨噬细胞被“驯化”成为能参与抗yan反应、血管生成以及促进中流生长转移的M2型巨噬细胞。胞外囊泡和外泌体

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