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产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是尤其重要的一条。2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；4)、非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；5)、DAB孵育时间过长或浓度过高；6)、PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要；7)、标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。LabEx 药物筛选平台：激酶抑制剂筛选，免疫检查点，GPCR，抗体药研发，蛋白互作。Uromodulin

LUMINEX常见问题及解答（二）6)客户自己提供抗体，是否可以进行LUMINEX检测？Luminex和ELISA检测试剂都需要两个配套的特异性抗体。我们公司具有开发Luminex试剂盒的经验。但是，需要一系列的开发工作才能保证结果的特异性、重复性和可靠性。7)除了蛋白，LUMINEX技术是否还可以用于其它指标的检测？可以用于基因表达，基因多态性和HLA配型分析。8)如何判定LUMINEX数据表达水平差异有无意义？表达差异主要取决于标本的性质和数量，我们公司为客户提供专业的数据统计服务。9)LUMINEX实验和流式细胞仪的优劣比较?Luminex技术是流式细胞仪和微球相结合的蛋白、核酸检测技术，检测对象是蛋白质、DNA等大分子。普通流式细胞仪主要用于检测整体细胞表面或细胞内的蛋白表达情况。Luminex检测蛋白和标本数目大，是一种高通量检测技术。普通流式细胞仪每次只能检测几种蛋白分子，而且检测速度较慢，不适合高通量分析。由此可见，两种方法应用方向有很大差别。TACILabEx可以提供包括MSD、Luminex、CBA以及抗体芯片在内的多因子检测服务。

免疫组化技术是用标记物标记的抗体与组织或细胞的抗原(如蛋白质、多肽、酶、***、病原体以及受体等)反应，结合形态学检查，对抗原作定性、定量、定位检测的技术。目前通常选用免疫酶组化间接染色法进行实验，利用该技术可进行细胞、亚细胞水平的检测。**近几年，分子生物学研究异常活跃，但**终还要归到形态上来。用免疫组织化学方法对所研究的大分子进行定位，进而深入研究其功能。分类：免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等特点：具有特异性强、灵敏度高及能将形态研究与功能、代谢研究有机地结合在一起实验标本：实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。抗体：免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体

基于luminex平台的xMAP技术：Luminex：应用荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。原理：应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达500个蛋白或基因。特点：1、既能检测蛋白，又能检测核酸2、既能用于临床，又能用于多学科科研领域3、真正意义的“高通量”检测，一次检测100个指标4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平LabEx提供酶联免疫吸附实验(ELISA)检测服务！

Luminex液相悬浮芯片是基于高通量微孔板的多重检测抗体芯片技术。其基本原理是将高度特异的捕获单克隆抗体偶联到不同荧光标记的磁珠上，将不同种类磁珠混合后悬浮于96孔微孔板中。在检测时，一束激光照射磁珠上的荧光，识别磁珠标记的捕获抗体，从而获知该磁珠可检测哪种细胞因子，从而实现“定性”作用。进一步，通过加入生物素标记的高亲和配对检测抗体，同步识别磁珠抓取的目标细胞因子，形成“三明治”结构，并加入SA-PE偶联上生物素，通过另一束激光照射进行信号放大检测，实现“定量”作用。电化学发光，一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，是电化学和化学发光两个过程的完美结合。CCL18

为啥高分的文章用的都在做细胞因子的检测？Uromodulin

酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。基本原理：它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于订量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。Uromodulin

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