使用研磨仪、研磨棒或者使用超声破碎细胞的方法破碎细胞,加入去污剂,如sds等,除去膜脂。去除细胞内的蛋白质,包括与DNA结合的组蛋白,通过加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提等方法去除。加入RNA酶去除RNA,如实验不严密,可省略此步。沉淀DNA,需在冷乙醇或异丙醇中沉淀,放在冰箱-20℃沉淀30分钟以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起发生沉淀。总结:DNA提取方法有下面⑦种一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。四.异丙醇沉淀法:基本同1法,*用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)五.表面活性剂快速制备法:用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和。植绒拭子对于许多应用领域有明确的优势。江西微细型尼龙植绒拭子
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相对湿度40%~90%的无腐蚀性气体、通风良好、阴凉干燥、清洁的环境中。CY-96000型鼻腔采样拭子:供医疗机构采集患者鼻腔内***的***及DNA样本。***采样拭子:用于流感、猪流感、禽流感、手足口等呼吸道及肠道***的鼻部及咽喉部采样。产品组成:⑴尼龙植绒拭子。(用于采样,释放量高达90%以上)三、产品特点:①采用国际通用的方便***的纸塑包装。②γ射线***,确保无菌。③大包装盒内的每套独立包装,方便使用。④针对不同的标本类型选用了不同的保存液。采样管(细菌、***、支原体、衣原体)产品优势:1、采集拭子特点:采集系统采用尼龙植绒拭子,对微生物***害,能很大程度的增加标本的采集及释放量。大量临床实验表明:与普通无菌棉拭子相比,尼龙植绒拭子有着更好的对临床微生物标本的采集与运送效果.尤其是对于那些不能及时送检、放置时间过长的标本而言更是如此。拭子的优势:①独有的喷射式植入尼龙纤维技术,增加标本的采集及释放量。②拭子全长,塑料杆上有独特的可折断设计。③绒毛质地可采集更多目标分析物。④没有标本残量,加快标本过程处理。⑤拭子为***独立包装。通用型植绒采样拭子是由尼龙短纤维绒毛头和医用级 ABS 塑料杆构成。
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