鼻腔灌洗液外泌体荧光标记

被特定部位的细胞获取的瘤子外泌体可为肿细胞的转移准备转移前微环境。用肺转倾向的肿细胞细胞来源的外泌体处理小鼠后可使骨转倾向的肿细胞细胞重新定向。外泌体的蛋白质组学分析发现不同部位倾向性的肿细胞细胞来源的外泌体具有不同的整合素（integrin）表达谱，整合素α6β4和α6β1与肺转有关，而整合素αvβ5与肝转有关。敲低整合素α6β4和αvβ5可减少外泌体被靶部位细胞获取，进而分别降低了肺和肝的转移。进一步研究发现外泌体整合素被细胞获取后活跃了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表达。通过临床数据分析显示外泌体整合素可作为预测肿细胞转移的部位倾向性的诊断指标。外泌体的提取的方式：PS亲和法。外泌体较有用的特性之一是它们穿过屏障（如细胞质膜和血/脑屏障）的能力。鼻腔灌洗液外泌体荧光标记

Exosome，中文名外泌体，是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。2015年，随着精确医学概念的提出，越来越多的人开始关注如何能做到疾病的精确诊断和诊疗。外泌体作为一个新型的研究热点，由于它在体内存在的普遍性和获取的便捷性，已经成为了疾病诊断诊疗的潜在有效方式，在精确医学发展上有着光明的前景。外泌体的提取的方式：超速离心法。山东CD63外泌体慢病毒包装外泌体的存在：外泌体几乎存在于所有的组织、细胞间隙、体液中。

内化的外泌体和内源性产生的外泌体的细胞旅程：外泌体可以通过不同的机制直接进入细胞。外泌体由细胞通过内吞作用过程从头生成。外泌体不断地被细胞产生和吸收。它们可能是新生成的外泌体和消耗的外泌体的混合物。目前尚不清楚内生性产生或消耗的外泌体是一起释放还是单独释放。被吸收的外泌体会被溶酶体降解。进入细胞的外泌体可能进入或与已存在的ESEs融合，随后解体并将其内容物释放到细胞质中。另外，内泌体可以与质膜融合并在细胞外释放外泌体。

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是目前外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。外泌体可由间充质干细胞、淋巴细胞和瘤子细胞等多种类型细胞主动分泌释放。

外泌体提取在短时间（一周之内）使用，可以放在4度保存，如果长时间保存可以放在-20度或-80度保存。也可以将外泌体进行分装，分别放在-20度或-80度。外泌体检测方法：外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。l、透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。2、纳米颗粒追踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础，它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃。超速离心提取外泌体

干细胞外泌体摄取流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法。鼻腔灌洗液外泌体荧光标记

外泌体的提取分离方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。2、试剂盒提取：近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化，也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。鼻腔灌洗液外泌体荧光标记

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