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每层铺好后先赶走气泡再铺另一层。在转移缓冲液中制备三明治可避免气泡的产生。④接上正负极，按膜向正极的方向将转移盒放入电转仪中，加入转膜缓冲液。⑤将电转仪置于冰水中，100V恒压转膜1h。⑥转膜结束后，快速取出PVDF膜，放入5BSA室温封闭2h。⑦取出膜，于摇床上用TBST洗膜5min3次。⑧孵育袋中加入TBST稀释的一抗（1500）4℃孵育过夜。⑨TBST洗膜5min3次，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗小鼠二抗（13000），室温孵育1h。⑩TBST洗膜10min3次。膜于化学发光检测试剂反应至暗处出现亮条带，取出膜，甩去多余的液体，用保鲜膜包好PVDF膜，暗室中用X胶片感光、显影、定影。三、实验结果蛋白DH。时间就是金钱，效率就是生命唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就。
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WB第三方检测的整个过程是：制胶-上样-电泳-转膜-（清洗玻璃板）-封闭-抗体孵育，到的显影。WB（Westernblot），即蛋白印迹或免疫印迹（immunoblotting），是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用，根据显色条带的位置和强弱实现蛋白鉴定和表达分析。WB技术具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性。选用合适的内参抗体能够校正蛋白定量和上样过程中的误差，通过灰度计量可以定性或定量分析不同样品中蛋白表达情况。瑞普信生物技术有限公司专业第三方检测QPCR。云南真实数据第三方检测中心
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