在生物学研究和蛋白质功能研究中,常用的方法之一是重组融合蛋白,简称融合蛋白。重组融合蛋白是由两个或两个以上原为不同蛋白质编码的基因组合而成的。由融合基因翻译而来的包含单个或多个多肽的重组融合蛋白获得了来自每个原蛋白的功能特性。融合蛋白有三个重要的用途:帮助纯化克隆基因,报告表达水平,作为组织化学标签,使蛋白质在细胞、组织或有机体中的位置可视化。在重组蛋白纯化中,重组融合蛋白法通常用于亲和层析,在亲和层析中,将易于纯化的蛋白与研究人员希望研究的蛋白相连接。许多蛋白质和多肽已被用作融合标签,包括谷胱甘肽- s -转移酶(gst标签)、麦芽糖结合蛋白(mbp标签)、多组氨酸(his标签)、人类生长因子、泛素和抗体表位。此外,β-半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白(GFP)通常作为部分蛋白表达和定位的报告因子。重组蛋白的表达系统有多种。ProSpecBMP-2重组蛋白
昆虫细胞是多种重组蛋白的多功能表达宿主。其较强的折叠能力和较高的培养密度使其成为表达细胞内复杂蛋白和病毒蛋白的理想选择。2007年,由昆虫细胞系以病毒样颗粒(VLPs)的形式生产的病毒疫苗Cervarix被批准用于人类。除了在疫苗开发方面的潜力外,昆虫细胞产生的高活性蛋白还应用于生物物理学和生物化学的各个学科,如结构解释、药物设计、测定方法建立和诊断试剂开发等等。许多生物厂家利用昆虫细胞进行重组蛋白产品开发和承包研究项目。ProSpecBMP-2重组蛋白进口重组蛋白质量好,能保证实验结果。
目前有超过180种重组蛋白药物被用作药物。重组蛋白药物是为急需新疗法的患者服务的一类重要药物。在许多疾病领域有**性的选择,重组蛋白药物现在是整个保健行业的一个重要组成部分。近一半的重组蛋白药物为单克隆抗体,其余可按功能细分如下: 替换缺失或有缺陷的蛋白质;增加已经存在的蛋白质数量;抑制病原体,如细菌或病毒;其他分子的载体(大部分仍在开发中)。我国重组蛋白药物目前共有20多家企业已上市 ,包括长春金赛、通化东宝、三生制药、甘李药业、恒瑞医药、安科生物等。
不同表达系统所生成的重组蛋白间有何主要区别?以赛默飞为例,Thermo Fisher Scientific™ 所提供的重组蛋白产品通常在大肠杆菌,昆虫细胞或哺乳动物细胞等不同的表达系统中产生。不同表达系统之间产生的重组蛋白的主要差别在于这些蛋白所携带的翻译后修饰,如糖基化修饰。在大肠杆菌中生成的重组蛋白未经糖基化。在昆虫细胞中产生的重组蛋白通常经有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脱盐酸,糖链也无复杂分支。在哺乳动物细胞中生成的重组蛋白会发生附带完全的糖基化修饰。备注:Mimic™ Sf9 昆虫细胞(来源于sf9昆虫细胞系,经改造可稳定表达多种哺乳动物糖基转移酶)可产生用于表达带末端唾液酸和半乳糖的复杂的N-糖链。45.苏州近岸蛋白专注生物医药领域中的重组蛋白质。
体外生产重组蛋白有多个表达系统,重组蛋白的预期用途对于表达系统的选择和决定其优先次序是很重要的。对于某些应用 (如功能解析或药物筛选) 来说,保持蛋白的天然功能和特性是必需的; 但如果是当成免疫原来使用则关系不大。其他需要实际考虑的因素包括蛋白质产量、时间限制或生产成本。明确项目需求对于确保选择合适的表达系统、克隆策略和所需产品的生产策略是至关重要的。实际上, 在缺少目标蛋白质或相似蛋白质历史表达数据的情况下,要预测某个蛋白质表达实验的结果是非常困难的。通常的做法是使用数个表达系统, 一开始使用简单的、性价比高的表达系统,失败后再使用更复杂的表达系统。R&D Systems是全球重组蛋白生产的前列。ProSpecBMP-2重组蛋白
选择重组蛋白定制需谨慎。ProSpecBMP-2重组蛋白
重组蛋白的生化和生物学特性对于选择表达策略来说是必须要考虑的,可以通过它们对表达结果和产物的可溶性做出初步预测。通过分析一级序列可以整合一组属性用以预测二级结构、生物学定位 (细胞膜、细胞质、周质腔或胞外)、家族归类 (折叠和结构域) 及推断生化性质 (等电点、无序区域、配基)。目标蛋白质的一些特征,如极可能存在的跨膜螺旋,可能要求必须使用为表达膜蛋白设计的系统,或需要使用克隆单个结构域的策略以表达蛋白质的可溶部分。使用目标蛋白质的特征来指导表达宿主的选择和载体的构建有助于获得成熟的、定位适当的蛋白质。可以使用目标蛋白质或同源蛋白质的实验数据和历史数据对序列信息加以补充,从而有助于表达系统的进一步优化。例如,已知某蛋白质需要某种辅基以保持正确的功目旨,那就必须选择特定的宿主以确保获得具有完整功能的表达产物。ProSpecBMP-2重组蛋白
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