“做miRNA下调，QPCR检测miRNA，表达水平无变化”如何解决呢？反义核酸是在转录后水平发挥功能，要阻断miRNA的产生，理想情况是在生成成熟的miRNA之前阻断。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能实现，Cas9通过在pre-miRNA序列中引入突变，从而破坏miRNA表达，是miRNA基因功能缺失研究的一种新方法。福建肖老师运用Cas9技术，针对miR-21基因设计sgRNA ，通过慢病毒递送细胞，并在RNA水平检测到mir-21的下调表达，从而研究出miR-21耗竭对CNE2鼻咽（NPC）细胞生物学特性及其潜在机制的影响。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈现出阳性，此外，温医大医院的张老师使用Cas9敲除mir-545，研究了人环状RNA PRKCI（circPRKCI）通过抑制miR-545显示致性，促进人类神经胶质瘤细胞的病理进展3。所以，CRISPR / Cas9对于miRNA的KO是有效的、被认可的、且以QPCR检测表达量完全没有问题。瑞普信生物技术有限公司专业的第三方检测ELISA。甘肃细胞迁移第三方检测
第三方检测细胞实验，细胞复苏、培养、冻存，购买原代细胞，细胞株，找成都瑞普信。细胞冻存的优点：1.适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。2.利用细胞冻存的形式来买卖、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%，15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。基础实验靠谱第三方检测公司，第三方细胞实验检测服务，上成都瑞普信。重庆可靠数据第三方检测中心瑞普信生物技术有限公司专业基础实验第三方检测公司。
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第三方检测细胞实验，QPCR实验，RT-PCR代测，QPCR代测，购买ELISA试剂盒、抗体，找成都瑞普信。QPCR实验常见问题合集：1.无Ct值出现。问题判断及解决：检测荧光信号的步骤有误:一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在结束时或延伸结束采集信号。引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的比较高浓度做起。模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。基础实验靠谱第三方检测公司，第三方WB实验、QPCR实验、ELISA试剂盒检测服务，就找瑞普信。瑞普信第三方检测WB，QPCR，ELISA，细胞实验。云南病理分析第三方检测方法
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磷酸化蛋白的WB第三方检测有哪些方法呢？50 度水浴 30min 后，用 TBST 洗 5 分钟 ,3 次即可去除已孵育结合的抗体。许多人会建议 55 度水浴 30min。Strip solution 是用来去除已结合的抗体，但也会去除部分的蛋白，导致蛋白信号变弱。我本人经实验发现水浴时有时温度不稳定，温度定为 55 度时往往其温度容易超过，导致较多的蛋白也被去除，故建议温度设为 50 度 30min ，既能有效去除已结合的抗体，又比 55 度更能保护蛋白。Strip 时一定要注意： membrane 一定要完全泡在 strip solution 中（可用较硬的塑料膜封好），然后要完全浸入水中，使受热均匀 。这一点很重要，要不然，随后压出来的总蛋白也好，内标也好就会不均一，无法进行比较。我曾将同一张membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次，分别压不同的抗体（因为有时候蛋白分子量很接近），效果都不错。甘肃细胞迁移第三方检测
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