瞬时转染方法1.接种细胞:转染前,用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,总体积如表1所示,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。
配制PEI转染试剂的注意事项有哪些?聚乙烯亚胺PEI转染试剂运输方式
PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限,被逼无奈只能放弃脂质体2000,选择PEI,以至于相当长的时间内,转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点:1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书,所用质粒尽量去内2.转染时,一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中,顺序不可错,轻微混匀,静止20min3.转染后4小时,一定要换液!换含有FBS的完全培养液!因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选,建议把血清浓度适当提高。PS:事实证明,PEI是可行的,已经做出稳定细胞系了。进口PEI转染试剂如何储存PEI转染试剂主要成分是什么?
注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒)。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。
注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒)。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。
用PEI转染时,一般和DNA的比例是多少?
稳定转染方法1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!PEI转染试剂主要用于用于抗体、蛋白和病毒载体生产。无动物源成分PEI转染试剂优化方案
PEI转染试剂保存条件是什么?聚乙烯亚胺PEI转染试剂运输方式
PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限,被逼无奈只能放弃脂质体2000,选择PEI,以至于相当长的时间内,转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点:1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书,所用质粒尽量去内2.转染时,一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中,顺序不可错,轻微混匀,静止20min3.转染后4小时,一定要换液!换含有FBS的完全培养液!因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选,建议把血清浓度适当提高。聚乙烯亚胺PEI转染试剂运输方式
上海曼博生物医药科技有限公司是以提供血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机为主的有限责任公司,公司始建于2019-02-15,在全国各个地区建立了良好的商贸渠道和技术协作关系。曼博生物以血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机为主业,服务于医药健康等领域,为全国客户提供先进血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机。多年来,已经为我国医药健康行业生产、经济等的发展做出了重要贡献。
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