脱靶检测

基因zhiliao产品特有的可能会引起迟发性不良反应的风险因素包括：基因组整合活性基因zhiliao产品可能会采用修饰宿主基因组的技术，并有可能在宿主细胞或组织中持续存在。很多基因zhiliao载体的基因整合不会指向基因组的特定位点，可能在整合位点处产生插入突变、或jihuo整合位点附近的原基因等，进而破坏重要基因功能或增加恶性liu的风险，例如，国外已有多项研究报告在接受了使用γ-逆转录病毒载体转导的基因修饰细胞zhiliao的受试者中发生白血病。因此，对于存在此类风险的产品，有必要进行长期随访临床研究以评估出现迟发不良反应的风险。基因编辑技术脱靶检测，推荐唯可生物，实验实力强，专业性高，检测效率高，结果准确率高。脱靶检测

基于已有科学经验和既往非临床/临床研究结果，如果认为基因修饰细胞所采用的载体系统可将外源基因整合到细胞基因组中并可在体内长期存续，需综合分析以上风险因素，评估潜在的插入突变、致瘤/致性风险。非临床研究，应采用具有代表性的基因转导细胞进行基因整合位点分析，分析细胞的克隆组成以及在关注基因（如liu相关调控基因）附近有无优先整合迹象，含有关注整合位点的细胞有无优先异常增殖。对于嵌合抗原受体（Chimericantigenreceptor，CAR）或T细胞受体（Tcellreceptor，TCR）修饰的免疫细胞，应尽可能采用多种方法评估其靶点相关毒性和脱靶毒性风险。脱靶检测针对各类脱靶检测方法存在的问题，开发了一种普遍适用的无偏脱靶识别方法DISCOVER-Seq。

近几年，细胞和基因zhiliao（cell & gene therapy，CGT）领域发展迅猛，在多个方向取得了重大突破，以anti-CD19和BCMA为代的多种CAR-T免疫细胞疗法攻克了一部分血液瘤，多种AAV疗法也给一些难以成药的罕见病提供了有效的zhiliao方案。另一方面，基于CRISPR基因编辑技术的众多基因疗法也进展迅速，较早体外基因编辑疗法较快今年年底能够上市（CRISPR Therapeutics CTX001），体内基因编辑疗法取得了不错的临床数据（Intellia Therapeutics NTLA-2001），使用CRISPR技术制造的通用型CAR-T疗法也是免疫细胞疗法发展的一大趋势（Caribou Biosciences CB-010）。

细胞经基因修饰后会改变其生物学特性，同时也会带来新的安全性风险，如基因编辑脱靶风险、载体插入突变风险、载体重组风险、表达的转基因产物的风险等。细胞经基因修饰后会改变其生物学特性，同时也会带来新的安全性风险，如基因编辑脱靶风险、载体插入突变风险、载体重组风险、表达的转基因产物的风险等。基于基因修饰细胞的产品种类繁多、各有特点，除上述一般技术要求外，还应基于产品的性进行相应的特殊考虑。本指导原则列举了以下三种情形的特殊考虑。如何降低脱靶效应？选择特异的gRNA； 使用RNP； 使用eSpCas9的质粒； 使用Nickase Cas9。

不同基因zhiliao产品的特殊考虑。关于整合性载体的特殊考虑如受试者接受整合性载体基因zhiliao产品，例如转座子元件、γ-逆转录病毒、慢病毒及其他逆转录病毒载体，或利用整合性载体或基于转座子的载体在体外修饰的细胞，长期随访中需格外关注基因zhiliao产品的基因组整合风险，建议申办方分析基因zhiliao载体在靶细胞或相关替代细胞的基因组中整合的影响（例如是否存在克隆性生长、是否存在优势克隆、克隆性生长是否导致恶性liu等）。如果基因组整合相关风险的分析可行，应注意以下几点：在接受基因zhiliao产品的较初5年内，两次检测间的采样间隔建议不超过6个月。此后每年至少检测一次，直至检测数据表明不再存在任何安全性风险。通过对DSB的标记实现了全基因组无偏脱靶检测，如IDLVs、BLESS、GUIDE-seq技术等。连云港crispr脱靶检测实验室

基因编辑治疗过程中安全性评价，即脱靶效应的检测。脱靶检测

国内外基因zhiliao产品开展的非临床研究、长期随访获得的临床经验以及基因组整合位点分析方法的明显改进，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao载体相关风险。通常认为，很多能够介导外源基因转入细胞核的载体（如逆转录病毒载体、转座子元件和基因编辑产品等）有基因组整合潜力，需要通过长期随访观察迟发性不良反应的风险；根据目前的认识和研究数据，质粒、痘病毒、腺病毒和腺相关病毒（AAV）等载体的基因zhiliao产品整合风险较低，国际上开展的临床试验中也表现出较低的迟发性不良反应风险。当载体或基因zhiliao产品原有的风险特征增加时，例如经过修饰以携带基因组编辑成分的质粒或改变给yaofang式以提高整合能力等，需要提高对长期随访观察的要求；反之，也可以对目前认为存在迟发风险的基因zhiliao载体进行修饰，以降低这些风险。脱靶检测