细胞因子的检测方法

Q：样本处理方案?A：血清：不含抗凝剂的**管**，室温静置2小时（避免震动，防止溶血），离心20min（4℃，2000g），取上清，建议再一次离心和取上清，建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存血浆：含抗凝剂（EDTA、肝素，具体采取哪种抗凝剂，参考说明书）的**管**，，离心20min（4℃，2000g），取上清，建议再一次离心和取上清，建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存细胞裂解液：收集细胞，PBS清洗后，离心10min（1000g，4℃），弃去上清，加入适量裂解液（107细胞对应200-300ul裂解液），放置于4℃冰箱（20min），离心10min（3000g，4℃），取上清，建议再一次离心和取上清，测定BCA总蛋白浓度，-80℃保存组织裂解液：适量RIPA裂解液加入组织中（10mg对应100-200ul裂解液），组织破碎器处理组织至匀浆（冰上处理），放置于4℃冰箱（20min），离心10min（3000g，4℃），取上清，建议再一次离心和取上清，测定BCA总蛋白浓度，-80℃保存细胞上清：离心，取上清，建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存LabEx 药物筛选平台：激酶抑制剂筛选，免疫检查点，GPCR，抗体药研发，蛋白互作。细胞因子的检测方法

细胞因子在肿块物医治中的作用Il-2：增强NK细胞和CD8T细胞功能；增加血管通透性IL-3：增强肿块物抗原呈递IL-4：增强嗜酸性粒细胞功能和T细胞活化IL-6：增强T细胞和B细胞功能；抑制IL-6可减少淋巴增生IL-7：增强T细胞功能IL-10：抑制肿块物抗原呈递IL-12：增强Th1免疫和细胞毒性；抑制血管生成IL-13：抑制对病毒性肿块物的细胞毒性IL-15：增强细胞毒性IL-18：增强Th1免疫和细胞毒性；抑制血管生成M-CSF：增强巨噬细胞功能GM-CSF：增强肿块物抗原呈递IFN-α：增强肿块物抗原呈递和细胞毒性IFN-γ：增强肿块物抗原呈递和细胞毒性TNF-α：诱导肿块物细胞凋亡TRAIL：诱导肿块物细胞凋亡FLT3ligand：刺激树突状细胞和NK细胞功能Lymphotactin：增强T细胞募集TGF-β：抑制T细胞效应器功能IsoPlexisLabEx 多因子检测平台：抗体芯片，液相芯片，电化学技术为主的多种检测技术。

Q：是否要用到试剂盒本身的试剂？

A：ELISA预实验要用到试剂盒的试剂，并且预实验做的样本越多，正式实验的样本可检测的就越少。

Q：ELISA实验可做波长？

A：ELISA通常是450nm，但是也有特殊实验需要其他波长。实验室可提供波长检测。光吸收：340nm/405/450/490/492/560/620nm/630nm荧光：320nm/340nm/620nm/665nm   。

Q：ELISA预实验是否要收费？

A：***次预实验不收费，第二次开始需要收取500元/次的费用每块板包含1次**预实验与1次正式实验。

LabEx可提供的服务及优势（二）LabEx服务的优势：1、专业的抗体公司；2、先进的实验仪器平台；3、可靠、放心的结果；4、实惠、亲民的价格；5、认真、严谨的工作态度。Luminex平台服务：应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种荧光免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此利用微球技术，可以同时检测高达500个蛋白或基因。MSD（MesoScaleDiscovery）：将WesternBlot从16小时缩短至4.5小时。针对550位北美和欧洲的生物医药研究人员的报告中显示,基于电化学发光技术的MSD（MesoScaleDiscovery）是较受欢迎的5大免疫分析品牌之一。CBA(CytometricBeadsArray)：即细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。LabEx现在配备先进的实验室仪器：Luminex检测平台，流式检测平台，MSD检测平台等。

液态流式技术(Luminex)流式荧光,又称悬浮阵列、液相芯片等，是近20多年逐渐发展起来的多指标联合诊断技术。该技术以荧光编码微球为中心,集流式原理、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体，多指标并行分析，可一管同时准确定量检测2-100种不同的生物分子;具有高通量、高灵敏度、并行检测等特点；可用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等多方面、多领域的研究。基本原理：应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分100种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达100个蛋白或基因。Luminex技术的测量结果在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平。Luminex应用的荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。多目标分子的同时测定可以减少生物样品的消耗量,节省成本和测定时间，并且使多种目标分子之间相关性的分析更加准确。细胞因子检测是一个强大的工具，通过定制识别产生积极反应的细胞因子的独特组合。flowjo软件降维分析方法

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基于luminex平台的xMAP技术：Luminex：应用荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。原理：应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达500个蛋白或基因。特点：1、既能检测蛋白，又能检测核酸2、既能用于临床，又能用于多学科科研领域3、真正意义的“高通量”检测，一次检测100个指标4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平细胞因子的检测方法

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