胸水外泌体蛋白质组学

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀，极大地降低了外泌体的提取成本，且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子，同时也表达胎盘特异性蛋白分子，证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见，动态光散射分析粒径，结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间，与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后，与细胞共孵育，荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性，进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体，并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定，为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。外泌体被工程化改造后，具有靶向特定细胞类型或组织的功能。胸水外泌体蛋白质组学

外泌体基础医学和临床应用的探索和深入研究对如何准确及高纯度提取外泌体,并完整保存提出了更高的技术要求。外泌体可通过差速超速离心在不同离心力下沉淀样品中不同的杂质组分,并在100000×g~200000×g的转速下获取较纯的外泌体。差速超速离心技术被认为是外泌体分离的“金标准”,也是目前常用的外泌体分离和浓缩方法。该方法可通过结合0.22μm或0.45μm孔径滤膜进行超滤来提高产物纯度减少外泌体的聚集,其分离效率容易受到加速度、转子类型、旋转半径、沉降路径长度以及样品黏度等多种因素影响。脑脊液外泌体粒径检测外泌体研究相对困难，需要尽快开发操作简单、可提取高纯度外泌体的技术。

细胞分泌外泌体的过程一般分为三个阶段:(1)质膜内陷,形成早期内吞小泡;(2)内吞小泡向内萌发成熟,形成多囊泡体;(3)多囊泡体与质膜融合,并释放出囊泡内容物,形成外泌体。外泌体具有独特的理化性质,其密度为1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的双层脂膜所包裹,具有典型杯状形态,呈现为扁平球形。外泌体表面富含多糖链,其质膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、胆固醇、神经酰胺和鞘磷脂构成,另有与细胞来源相关的部分特殊脂类。外泌体可携带蛋白质、核酸和脂质等生物活性大分子,其中主要为蛋白质,且大部分蛋白为所有来源外泌体所共有,只有小部分与其来源有关,为其分泌细胞的特有蛋白,能够反映分泌细胞的类型和生理病理状态。除此之外,外泌体可携带大量mRNA和miRNA等核酸,并将其运输到靶细胞,发挥相应的生物学功能。

小鼠骨髓树突状细胞产生的外泌体中含有的中流多肽能够启动特异性细胞毒性T淋巴细胞，根除或抑制小鼠中流的生长，这一发现为中流免疫zhiliao提供了新的研究思路。另外，树突状细胞来源的外泌体也能够通过激huo其他免疫细胞诱导抗中流反应，从而抑制中流。B细胞分泌的外泌体包含MHCⅡ-多肽复合物，能够激huo人和小鼠抗原特异性T细胞，从而实现调节免疫响应的功能。细菌或病原体感ran的巨噬细胞外泌体能够刺激巨噬细胞和中性粒细胞分泌炎性介质，在增强机体免疫监督方面发挥重要作用。PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。

与PC-3细胞相比，PC-3细胞外泌体中含有较高丰度的鞘糖脂、鞘磷脂、胆固醇和磷脂酰丝氨酸。外泌体常见的表面蛋白质包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纤连蛋白)等，而外泌体囊泡内蛋白质则与来源细胞内的蛋白质密切相关，包含例如热休克蛋白(HSP70、HSP90)和细胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌体中还携带有来源细胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遗传物质。外泌体的完整囊泡结构能够保护其内部生物分子不受体液中各种酶的影响从而保持其完整性和生物活性。科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。胸水外泌体蛋白质组学

蛋白质分子在外泌体信号传递过程中起到了非常重要的作用。胸水外泌体蛋白质组学

外泌体即细胞分泌的直径约40-100nm的微小膜泡，多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。一开始被当做细胞排泄物，但是近几年，研究发现外泌体可谓是小身体大作用。种瘤发生转移后，如何靶向呈递药物一直是种瘤医治中的一个巨大挑战。发表于NanoLett的一项研究中，研究人员利用外泌体制备药物的递送系统（LD-MDS），并取得成功。在这项研究中，研究人员将相关药物锚定在活巨噬细胞膜上，细胞自身相关蛋白酶响应开启并将药物转载进入外泌体，顺利递送至肺转移灶并且转化为纳米囊泡和次级纳米囊泡，促进转移性4T1病细胞的有效内化和细胞死亡。之后，受损的4T1病细胞可以释放次级纳米囊泡和游离药物分子，再破坏邻近的病细胞。研究显示，LD-MDS对体内直径小于100μm的肺转移病灶显示出优异的靶向效率，并显着压制肺转移。胸水外泌体蛋白质组学