外泌体中包含的mRNAs和miRNAs在进入受体细胞后仍具有翻译蛋白质、促进病毒感ran等功能。据估计,单个外泌体含有约≤100拷贝数的蛋白质和≤10000拷贝数的核苷酸。不同细胞来源的外泌体中既包含与细胞形成、结构和物质转运相关的共有成分,也包含与来源细胞的生物功能相关的特异分子。如B淋巴细胞、树突状细胞、肥大细胞和肠上皮细胞来源的外泌体含有大量的主要组织相容性复合体蛋白质MHCclassⅡ和MHCclassⅠ,血小板和T细胞来源的外泌体则包含诸如血管性血友病因子、穿孔素和颗粒酶等特殊蛋白质,而ai细胞来源的外泌体表面可能含有中流特异的蛋白质分子。这类特异分子在外泌体介导细胞信号转导、参与生理病理过程中发挥至关重要的作用。外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而唤醒靶细胞细胞内的信号通路。江西外泌体miRNA测序
在血液和大多数体液(如尿液、脑脊液、唾液、胸腹腔积液、羊水和乳汁等)中均可检测到外泌体。血液外泌体的检测通常采用EDTA抗凝血分离的血浆,miRNA等一些微小RNA则采用血清样本。泌尿系统中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs,但外泌体外膜则可帮助RNA免于被降解,因此研究尿液外泌体miRNAs更具有应用价值。相较于血清中相关miRNA的水平,脑脊液外泌体中的miR-21可作为胶质瘤诊断和预后的指标,特别对预测中流复发或转移具有价值。唾液样本在安静状态下主要来源于舌下腺和颌下腺,刺激状态下则主要来源于腮腺。血浆血清提取试剂盒生产厂家干细胞外泌体可以有效活化提高细胞能量加速细胞排毒、淡化色斑。
Vlassov等人发表的一篇外泌体的提取方法及组成的专利文献中介绍,通过终浓度为8%的PEG6000与生物体液共孵育14h后,10000xg离心1h,可将直径在30-150nm之间,且包含丰富RNA的外泌体沉淀下来。因此采用终浓度为8%的PEG6000沉淀血清中的外泌体,为了进一步纯化胎盘相关外泌体,将获得的包含外泌体的沉淀用PBS重新悬浮后,加入非线性蔗糖密度梯度层,10000xg超速离心5h,将分层液采用PEG6000进行2次沉淀。经过多次实验反复验证,确定同时表达外泌体标志蛋白分子及胎盘特异性蛋白分子的胎盘来源外泌体所在密度层。
目前为止已鉴别了2500余种miRNAs分子。例如,血液外泌体miR-21的升高已被证实与胰腺ai、结直肠ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai及食管ai等多种中流相关,可能与其参与中流xue管生成有关,研究表明肺ai细胞释放的外泌体miR-21会通过STAT3依赖机制诱导周围支气管细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的产生,从而促进血管生成。在食管ai中,miR-21还可以反映中流的恶性程度,食管ai患者的miR-21水平与良性中流患者相比急剧上升,上升的miR-21水平也与中流的淋巴侵袭和转移相关。在膀胱ai患者中,尿液中的miR-21和miR-4454会明显上调。近些年关于外泌体研究很普遍。
在免疫系统中,淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等均可以产生外泌体。研究表明免疫细胞来源的外泌体能够明显影响机体的免疫调节机制,包括调节抗原呈递、免疫激huo、免疫监督等。不同免疫细胞来源的外泌体功能不同,以树突状细胞(该细胞具有免疫刺激能力,是目前能够激huo初始T细胞的抗原递呈细胞)来源的外泌体为例,其外泌体的免疫刺激作用取决于来源细胞的成熟状态。成熟的树突状细胞外泌体内包含能够直接激huoT细胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,共刺激分子如CD40、CD8、CD86和热激蛋白,这些分子使树突状细胞来源的外泌体具有抗原呈递、调节免疫响应的生物功能。外泌体作为脑内种瘤和神经退行性疾病的新型标记物。吉林血液外泌体
PS亲和法提取的外泌体,其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。江西外泌体miRNA测序
利用抗ai症药物进行中流zhiliao是抑制中流的一个重要方法,不过目前抗ai症药物的运载存在着种种挑战,主要体现在以下几点:(1)抗ai症药物的疏水性;(2)抗ai症药物的毒性以及非靶向性;(3)易被人体清chu,体内循环的半衰期很短等。采用外泌体运输抗ai症药物,可以提高药物体系的水溶性,降低药物对人体的毒性以及避免被网状内皮系统捕捉从而延长其循环时间。近期,两种抗ai症药物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已经成功被载入外泌体中,并对其抗中流作用进行了研究。江西外泌体miRNA测序