培养基的配制:分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角瓶:若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15~20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。试管分装:液体培养基一般装4~5ml,约试管的1/4高度;固体斜面培养基一般装3~4ml,约试管的1/5高度。包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。摆斜面:灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。贮存:培养基在30℃下放置,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。培养基长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。湖南培养基灭菌 培养基制备器
固体培养基的制作步骤:1、首先我们要准备好一个装有1000ml的烧杯,然后在准备好的杯中在放入500ml的蒸馏水,在将牛肉膏和蛋白胨、氯化钠这些都溶解在水中。2、其次我们在调节PH值,调节时需要百分之10的氢氧化钠溶液,将PH值调到7.2,在此也要定容到1000ml,较后在将这些液体都分别放入10个锥形瓶内,每一瓶都装100ml。3、然后我们再把剪碎的琼脂放进五个锥形瓶里,在给每个锥形瓶中放入2.4克,然后在把这十个锥形瓶瓶口都弄上棉花塞,瓶子也要弄上报纸。4、较后我们就可以将刚才所包扎好的一些锥形瓶放入灭菌锅里,灭菌时一定要记得灭菌十分钟,十分钟到了之后,在将锥形瓶拿出来,冷却之后就成了固体培养基了。注意事项:倒入时一定要注意容易。灭菌时间十分钟,要看好时间。注意事项:倒入时一定要注意容易。灭菌时间十分钟,要看好时间。湖南培养基消毒 培养基制备器培养平板培养基也叫平面培养基、平皿培养基。
配制好的培养基保存:灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量,应该是在较长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保存;倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完,应于冷藏保存,如果保存时间超过2天,应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期,应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。
根据培养基的用途来区分,可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等。a.选择培养基在培养基中加入某种物质以杀死或压抑不需要的菌种生长的培养基,称之为选择培养基。如链霉素、氯霉素等压抑原核微生物的生长;而制霉菌素、灰黄霉素等能压抑真核微生物的生长;结晶紫能压抑革兰氏阳性细菌的生长等。b.增殖培养基在自然界中,不同种的微生物常生活在一起,为了分离我们所需要的微生物,在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质,以增加这种微生物的繁殖速度,逐渐淘汰其它微生物,这种培养基称为增殖培养基,这种培养基常用于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲,增殖培养基也是一种选择培养基。c.鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品,使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别,因而有助开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理:血清中沉淀物的出现有许多种原因,但好普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成的,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量。若想去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。何谓热灭活:一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和启动。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性。中国香港培养基灭菌 培养基制备器
有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生,或适当提高灭菌温度。湖南培养基灭菌 培养基制备器
培养基是生物制品领域中常用的物质,在细菌和细胞培养中十分必要,但是现有技术中有些培养基的某种组份容易分解,造成保存时间短等问题,导致培养基的使用成本十分高。其中,在动物培养基中,谷氨酰胺是一种必要的组份,但是在常温下,很短的时间内,约7-10日中培养基中的谷氨酰胺成份就可降解90%以上,这给其商品化带来很大的困难。这样的培养基在现有技术中很多,都具有上述的缺陷,例如,中国CN1087778C公开了一种杂交瘤细胞的无血清培养基,其中包含有谷氨酰胺成份,但是这种培养基的保存时间十分有限,很难达到商业使用的目的。湖南培养基灭菌 培养基制备器
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