微生物限度:细胞培养基不是无菌产品,其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖,导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中细菌和霉菌,是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华人民当地药典》2005版二部附录第100页的口服给药制剂的微生物限度标准,并严于该标准,规定细胞培养基产品的细菌数每1g不得超过200个,霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1g,加入无菌纯化水10mL溶解,混匀即得试样。按中华人民当地药典2005年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法进行,检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。培养基制备器应存放于冷暗处,较好能放于普通冰箱内。全自动培养基制备器安装调试
培养基配制:配制用水,培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基:培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清:培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。全自动培养基制备器安装调试培养基制备器全自动程序,无人值守;分装过程无需人工干预。
培养基的灭菌:培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、灭菌15min,但容器和装量较大时,应延长至20min。含糖培养基115℃、灭菌30min。含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,连续3d,间歇灭菌。血清或组织液,采用低热56—58水浴1h,连续5—6d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认,如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、灭菌30min为好。
微生物检验培养基制备的要点:培养基分装,准备好的中.海培养基根据用途不同分为烧瓶、试管等容器,分装试管量大采用自动分液器,分装试管量小,可以用漏斗分液。分液量不超过容器体积的三分之二。三角瓶不要超过体积的二分之一;琼脂斜面不要超过试管长度的五分之一。灭菌后斜面应为培养基量的三分之一,底层应为培养基量的三分之二;半固态琼脂的体积为三分之一;用于接种或保护细菌的高级琼脂,分装试管长度的三分之一和四分之一,接种厌氧菌的量应达到三分之二;琼脂平板90毫米内径13~15毫升,内径70毫米8~10毫升。如果琼脂平板表面较水,可将平板倒置,置于37℃培养箱中三十分钟,晾干后使用。每批培养基分装在二十毫升左右的小玻璃瓶中,与该批培养基同时灭菌,在以确定这批培养基的很终pH值。培养基制备器内部的管道和容器可以更换,方便移除和清洗。
高压灭菌造成培养基结焦焦化问题:在实验过程中,检测人员发现在高压灭菌后的培养基有结焦焦化现象。微生物认为造成这种现象是:控制培养基在容器中不要超过百分之八十,避免填充过多。注意控制高压灭菌时间过长(115-116度)二十分钟即可,温度不超过121度,而且灭菌后的培养基在高温环境中不要长时间存放。以上原因都会导致培养基结焦焦化。贮存:培养基在30℃下放置1天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。半合成培养基在合成培养基中,加入某种或几种天然成分。吉林自动培养基制备器
培养基制备器系统自动调整供给样品剂量保证了重现性结果。全自动培养基制备器安装调试
溶化:培养基放入烧杯或瓷缸中,慢慢加入少量所需水,边加入边用玻璃棒搅拌。如果培养基中不含有琼脂,培养基不需要加热;如果含有琼脂,则需要用本生灯或电磁炉加热煮沸,完全溶解后,再补齐所需水,并搅拌均匀。如果配置的培养基量很大,可用不锈钢锅加热溶化,可先用温水加热并随时搅动,防止焦化,如有焦化现象,配制的培养基就不能使用,要重新配制。配制培养基时不可用铜或铁的容器溶化,因铜或铁制容器可能会使培养基中的铜和铁的含量超标,影响实验(培养基中铜含量大于0.3mg/L,细菌不宜生长,铁含量超过0.14mg/L,妨碍细菌产有害)。对容易发生反应,产生沉淀的药品,要分开溶解,较后加入培养基,如磷酸二氢钾和硫酸镁。全自动培养基制备器安装调试
赛锶钛氪(上海)贸易有限公司总部位于上海市松江区沈砖公路6000弄1号206室,是一家从事电子产品及配件、电机、五金交电、金属材料材料(钢铁、稀有金属除外)、化工原料(除危险品)、实验室仪器设备、计量设备、检验设备、办公用品、日用百货、计算机及配件、传感器的批发、进出口、佣金代理(拍卖除外),并提供相关配套服务;生物技术专业领域内(不含转基因生物、人体干细胞、基因诊断)的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,实验室仪器设备的安装、维修。的公司。赛锶钛氪深耕行业多年,始终以客户的需求为向导,为客户提供高质量的灭菌器,培养基制备器,培养基分装机,灭菌柜。赛锶钛氪致力于把技术上的创新展现成对用户产品上的贴心,为用户带来良好体验。赛锶钛氪始终关注机械及行业设备市场,以敏锐的市场洞察力,实现与客户的成长共赢。
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