细胞培养中，需要去除支原体的污染：支原体污染是细胞培养中 普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响： 01/ 争夺营养 – 阻碍细胞生长和增殖 02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形...

  细胞库支原体检测的必要性主要体现在以下几个方面： 1. 确保细胞库的质量与安全性：细胞库的建立需要为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。支原体检测是确保细胞库中细胞质量的重要环节。 2. 符合监管要求：支原体检测是生物制品安全性监管的一部分，全球范围内的药典、法规和指导文件中都有支原体检测的相关说明...

  免疫沉淀（Co-IP）实验中抗体的选择非常关键，因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。 1. 特异性：抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性，以避免与其他蛋白发生非特异性结合，导致假阳性结果。 2. 亲和力：抗体对目标蛋白的亲和力要足够高，以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。 3. 抗体类型：单克隆...

  细胞被支原体污染后可能会出现以下几种情况： 1. 生长速度变慢：支原体污染的细胞生长速度可能会减慢，甚至停止生长。 2. 形态改变：部分细胞可能会变圆，从培养瓶壁脱落。有些细胞在支原体污染后，形态变化可能不明显，但有些细胞可能会出现体积增大、细胞碎片增多等现象。 3. 培养液pH变化：支原体污染的细胞可能导致培养液p...

  RIP实验步骤通常包括： 1. 细胞收集与交联：培养细胞至适当密度。使用交联剂（如甲醛）进行交联，以固定蛋白质-RNA复合物。 2. 细胞裂解：收集细胞并进行裂解，释放RNA-蛋白质复合物。在裂解过程中添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解。 3. 超声处理：使用超声波破坏细胞，获得更小的染色质片段，这有助于后续步骤中抗体...

  对于同一个样品，如果一步法恒温试剂盒检测结果为阳性，而PCR检测为阴性，可能的原因包括： 1. 检测的支原体种类不同：一步法恒温试剂盒可能检测的支原体种类更多，例如可以涵盖27种支原体，而PCR检测可能只针对常见的12种支原体进行检测。因此，如果样品中污染的支原体种类不在PCR检测的范围内，就可能出现一步法检测为阳性而PCR检测...

  免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种利用抗体与特定蛋白质结合的特性，从复杂样本中分离和纯化目标蛋白质的实验方法。这项技术在生物医学研究中有着广泛的应用场景，以下是一些主要的应用领域： 1. 蛋白质相互作用分析：通过免疫沉淀技术，研究人员可以研究蛋白质之间的相互作用，揭示蛋白质复合物的组成以及它们在...

  免疫沉淀（ChIP）实验中抗体的选择非常关键，因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。 1. 特异性：抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性，以避免与其他蛋白发生非特异性结合，导致假阳性结果。 2. 亲和力：抗体对目标蛋白的亲和力要足够高，以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。 3. 抗体类型：单克隆抗...

  真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。 ...

  根据提供的信息，支原体去除试剂是一种混合制剂，通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果，同时对细胞无伤害。它被设计为对细胞毒性小，不影响后续的细胞实验，包括细胞活力检测和细胞转染等。这表明使用支原体去除试剂去除支原体后，理论上不应该对细胞的转染效率产生负面影响。 此外，支原体污染本身会对细胞的转...

  检测新鲜培养基是否有支原体污染，可以采用以下五种方案： 1. 培养法：这是一种传统且可靠的方法，通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上，观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时，但成本较低。 2. 荧光染色法：使用特定的荧光染料（如Hoechst 33258）对细胞进行染色，然后在荧光显微镜下观察。如果存...

  目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中，其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样，主要来源包括实验室人员、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外，来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂；非无菌供应品、培养基和溶液；实验...